L-PRF Plus niet-chirurgische parodontale behandeling

Materialen en methoden Onderzoeksopzet en patiëntenselectie Er werd een split-mouth, gerandomiseerde, gecontroleerde klinische studie opgezet met 13 patiënten (8 mannen en 5 vrouwen, gemiddelde leeftijd 52,3 ± 9,4 jaar). De patiënten werden geïnformeerd over de voordelen en risico's van de studie en elke deelnemer ondertekende geïnformeerde toestemming.

Niet-chirurgische parodontale behandelingen Een enkele parodontoloog (L.C.) voerde alle parodontale behandelingen uit. NSPT bestond uit twee sessies van scaling en rootplaning (SRP) binnen 48 uur onder lokale anesthesie met behulp van ultrasone en handinstrumenten. Bovendien werden de plaatsen geassocieerd met PPD ≥ 6 mm in het kwadrant toegewezen aan de testgroep geïrrigeerd met L-PRF-exsudaat en gevuld met longitudinale stukken L-PRF-membraan. De patiënten kregen instructies over een zacht dieet, een zorgvuldige en zachte mondspoeling met chloorhexidine 0,12% en geen tandenpoetsen gedurende 7 dagen om verwijdering van L-PRF te voorkomen. Na deze periode werden de volgende instructies gegeven: aangepaste Bass-poetstechniek, flosdraad en interdentale ragers, en chloorhexidine 0,12% mondspoeling voor nog eens 7 dagen. Bij elke afspraak werd ook een strikte hygiënecontrole uitgevoerd door de clinicus.

L-PRF-membraanbereiding Twee monsters veneus bloed werden verzameld in 2 vacutainerbuizen (rode cup) van 10 ml zonder antistollingsmiddel. Ze werden 12 minuten gecentrifugeerd bij 408 g met behulp van een tafelcentrifuge (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, VS) volgens het protocol beschreven door Temmerman et al.18 De L-PRF-stolsels werden uit de buis verwijderd, gescheiden van de rode bloedcellen en in de Xpression-box (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, VS) geplaatst om ze voorzichtig in membranen te comprimeren. De membranen werden in longitudinale stukken gehakt om de parodontale pockets ≥ 6 mm te vullen. Het exsudaat dat tijdens de compressie vrijkwam, genaamd L-PRF-exsudaat, werd opgezogen om de behandelde pockets te spoelen. (Figuur 1)

Klinische metingen Alle klinische metingen werden uitgevoerd door een enkele getrainde en gekalibreerde examinator (N.J.) die gemaskeerd was voor de toegewezen behandeling, met behulp van een basisonderzoeksinstrumentkit en een University of North Carolina no. 15 kleurgecodeerde parodontale sonde. De volgende klinische parameters werden gemeten bij baseline en 6 weken, 3 maanden en 6 maanden na de behandeling: pocketdiepte (PPD), klinisch hechtingsniveau (CAL), gingivale recessie (GR), bloeding bij sonderen (BOP) en O´ Leary plaque-index (PI).19 Bovendien werd de wortelgevoeligheid (RS) geëvalueerd met behulp van een 100 mm visuele analoge schaal (VAS) (0 geeft geen pijn aan, 50 geeft gemiddelde aan en 100 geeft ondraaglijke pijn aan) na 24 uur, 6 weken, 3 maanden en 6 maanden na behandeling. De verandering in PPD, CAL, GR, BOP, PI en RS (verschil tussen baselinemetingen en na 1, 3 en 6 maanden) werd berekend.

GCF-verzameling GCF-monsters werden verzameld uit de diepste pocket van elk kwadrant voordat de klinische meting werd vastgelegd (baseline, en 6 weken en 3 maanden na behandeling) om de concentratie van Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (P.i) en Fusobacterium nucleatum (F.n). Het monstergebied werd geïsoleerd met wattenrollen en verontreiniging met speeksel werd vermeden met behulp van een geschikte zuig- en luchtspray. Vervolgens werd een endodontische papierpunt nr. 35 ingebracht totdat een lichte weerstand werd gevoeld en deze werd 30 seconden vastgehouden. De paperpoints werden onmiddellijk in een Eppendorf-buis geplaatst en bij -80°C bewaard voor toekomstige analyse.

Microbiologische verwerking Na het ontdooien van de monsters werd 1 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) toegevoegd en gehomogeniseerd. Vervolgens werd 400 μl van elk monster gedurende 3 minuten gecentrifugeerd bij 13200 rpm. De verkregen pellet werd gedispergeerd in 200 μl InstaGene. DNA werd geëxtraheerd met InstaGene-matrix (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, VS) volgens de instructies van de fabrikant. Vijf microliter van het gezuiverde DNA werd gebruikt voor de kwantificering van Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum en Prevotella intermedia. Een kwantitatieve polymerasekettingreactie (qPCR) -test werd uitgevoerd met een CFX96 Real-Time System (Biorad, Hercules, CA, VS) met behulp van de Taqman 5'-nuclease-assay-PCR-methode voor detectie en kwantificering van bacterieel DNA. Taqman-reactie bevatte 12,5 μl Mastermix (Eurogentec, Seraing, België), 4,5 μl steriel gedestilleerd water, 1 μl van beide soortspecifieke primers en probe (tabel 1) en 5 μl template-DNA. De testomstandigheden voor alle primer/probe-sets bestonden uit een eerste 2 min bij 50°C, gevolgd door een denaturatiestap van 10 min bij 95°C, gevolgd door 45 cycli van 95°C gedurende 15 sec en 60°C gedurende 60 sec . Kwantificering was gebaseerd op een plasmidestandaardkromme. De delta voor bacteriële concentratie na 6 weken, 3 en 6 maanden (verschil tussen baselinemetingen en na 6 weken, 3 en 6 maanden) werd berekend.

Randomisatie, verborgen toewijzing en kalibratie Er werd een toss-methode gebruikt om de kwadranten van de patiënt toe te wijzen aan twee behandelingsgroepen: (SRP + L-PRF) of controle (alleen SRP).

Voordat het onderzoek begon, werden twee registraties van de volgende parameters uitgevoerd: PPD, GR en CAL bij vijf patiënten, met een interval van 24 uur tussen de eerste en tweede registratie om de nauwkeurigheid binnen de onderzoeker te valideren. Alle tanden, met uitzondering van de derde molaren, werden gemeten door parodontaal sonderen op 6 plaatsen (mesiobuccaal, mediobuccaal, distobuccaal, mesiolinguaal/palataal, mediolinguaal/palataal en distolinguaal/palataal). Kalibratie werd geaccepteerd als de metingen bij baseline en na 24 uur binnen 1 mm op het 95%-niveau waren (correlatiecoëfficiënten tussen dubbele metingen; r = 0,95).

Statistische analyse Om een ​​gemiddeld verschil in PPD van 1,2 mm met een standaarddeviatie van 1,0 bij een α-niveau van 0,05 en een β-niveau van 0,10 (power = 0,9) te detecteren, was een steekproefomvang van 10 patiënten vereist. Ondanks de resultaten, maar om te anticiperen op mogelijke uitval tijdens het onderzoek, werd een steekproefomvang van n = 16 patiënten overwogen.

Bacterietellingen werden log-getransformeerd. Een lineair gemengd model werd toegepast met de variabele patiënt als willekeurige factor en tijd en behandeling als twee gekruiste vaste factoren. Roken en PI werden beschouwd als covariabelen. Er werden contrasten ingesteld om de verandering ten opzichte van de basislijn te berekenen voor de verschillende tijdstippen tussen de behandelingen en voor elke afzonderlijke behandeling. Er is gecorrigeerd voor gelijktijdige hypothesetoetsing volgens Sidak. Er werden een normale kwantielplot en een residuele dot-plot van de residuwaarden gemaakt, waaruit bleek dat de aannames die aan het statistische model ten grondslag lagen, konden worden gemaakt.