Tratamento periodontal não cirúrgico L-PRF Plus

Materiais e Métodos Desenho do estudo e Seleção de Pacientes Foi realizado um ensaio clínico randomizado controlado de boca dividida envolvendo 13 pacientes (8 homens e 5 mulheres, idade média de 52,3 ± 9,4 anos). Os pacientes foram informados sobre os benefícios e riscos do estudo e cada participante assinou o consentimento informado.

Tratamento periodontal não cirúrgico Um único periodontista (L.C.) realizou todos os tratamentos periodontais. O NSPT consistiu em duas sessões de raspagem e alisamento radicular (SRP) dentro de 48 horas sob anestesia local usando instrumentação ultrassônica e manual. Além disso, os locais associados com PPD ≥ 6 mm no quadrante atribuído ao grupo de teste foram irrigados com exsudato de L-PRF e preenchidos com pedaços longitudinais de membrana de L-PRF. Os pacientes receberam orientações sobre dieta pastosa, enxaguatório bucal cuidadoso e suave com clorexidina 0,12% e não escovar os dentes durante 7 dias para evitar a remoção do L-PRF. Após esse período, foram dadas as seguintes orientações: técnica de escovação de Bass modificada, fio dental, escovas interdentais e enxaguatório bucal com clorexidina 0,12% por mais 7 dias. Um rigoroso controle de higiene pelo clínico também foi realizado em cada consulta.

Preparo da membrana L-PRF Foram coletadas duas amostras de sangue venoso em 2 tubos vacutainer (copo vermelho) de 10 ml sem anticoagulante. Eles foram centrifugados a 408 g por 12 minutos usando uma centrífuga de mesa (IntraSpinTM, Intralock®, Flórida, EUA) de acordo com o protocolo descrito por Temmerman et al.18 Os coágulos de L-PRF foram removidos do tubo, separados das hemácias e colocados na caixa Xpression (IntraSpinTM, Intralock®, Flórida, EUA) para comprimi-los suavemente em membranas. As membranas foram cortadas em pedaços longitudinais para preencher as bolsas periodontais ≥ 6mm. O exsudato liberado durante a compressão, denominado exsudato L-PRF, era aspirado para a lavagem das bolsas tratadas. (Figura 1)

Medições clínicas Todas as medições clínicas foram realizadas por um único examinador treinado e calibrado (N.J.) que foi mascarado para o tratamento designado, usando um kit de instrumentos de exame básico e um University of North Carolina no. Sonda periodontal codificada por 15 cores. Os seguintes parâmetros clínicos foram medidos no início e 6 semanas, 3 meses e 6 meses após o tratamento: profundidade da bolsa de sondagem (PPD), nível de inserção clínica (CAL), recessão gengival (GR), sangramento à sondagem (BOP) e O´ Índice de placa de Leary (PI).19 Além disso, a sensibilidade da raiz (RS) foi avaliada usando uma escala visual analógica (VAS) de 100 mm (0 indicando nenhuma dor, 50 indicando média e 100 indicando uma dor insuportável) em 24 horas, 6 semanas, 3 meses e 6 meses após o tratamento. A mudança em PPD, CAL, GR, BOP, PI e RS (diferença entre as medidas iniciais e em 1, 3 e 6 meses) foram calculadas.

Coleta de GCF Amostras de GCF foram coletadas da bolsa mais profunda de cada quadrante antes de registrar a medição clínica (linha de base e 6 semanas e 3 meses após o tratamento) para avaliar a concentração de Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (P.i) e Fusobacterium nucleatum (F.n). A área amostral foi isolada com rolos de algodão e a contaminação com saliva foi evitada por meio de sucção e spray de ar apropriados. Em seguida, uma ponta de papel endodôntica nº 35 foi inserida até sentir uma leve resistência e foi mantida por 30 segundos. As pontas de papel foram imediatamente inseridas em um tubo Eppendorf e armazenadas a -80ºC para análise futura.

Processamento microbiológico Após o descongelamento das amostras, adicionou-se 1ml de solução salina tamponada com fosfato (PBS) e homogeneizou-se. Em seguida, 400 μl de cada amostra foram centrifugados a 13200 rpm por 3 minutos. O pellet obtido foi disperso em 200 μl de InstaGene. O DNA foi extraído com matriz InstaGene (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Cinco microlitros do DNA purificado foram utilizados para a quantificação de Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum e Prevotella intermedia. Um ensaio quantitativo de reação em cadeia da polimerase (qPCR) foi realizado com um CFX96 Real-Time System (Biorad, Hercules, CA, EUA) usando o método Taqman 5' nuclease assay PCR para detecção e quantificação de DNA bacteriano. A reação de Taqman continha 12,5 μl de Mastermix (Eurogentec, Seraing, Bélgica), 4,5 μl de água destilada estéril, 1 μl de primers e sonda específicos para cada espécie (Tabela 1) e 5 μl de DNA modelo. As condições do ensaio para todos os conjuntos de primer/sonda consistiram em 2 minutos iniciais a 50°C, seguidos por uma etapa de desnaturação por 10 minutos a 95°C, seguido por 45 ciclos de 95°C por 15 segundos e 60°C por 60 segundos . A quantificação foi baseada em uma curva padrão de plasmídeo. O delta para concentração bacteriana em 6 semanas, 3 e 6 meses (diferença entre as medidas basais e em 6 semanas, 3 e 6 meses) foi calculado.

Randomização, ocultação de alocação e calibração Um método de sorteio foi usado para atribuir os quadrantes dos pacientes em dois grupos de tratamento: (SRP + L-PRF) ou controle (SRP sozinho).

Antes de iniciar o estudo, foram feitos dois registros dos seguintes parâmetros: PPD, GR e CAL em cinco pacientes, com intervalo de 24 horas entre o primeiro e o segundo registro para validar a precisão intraexaminador. Todos os dentes, excluindo os terceiros molares, foram medidos por sondagem periodontal em 6 locais (mésio-vestibular, medio-vestibular, disto-vestibular, mésio-lingual/palatina, medio-lingual/palatina e disto-lingual/palatal). A calibração foi aceita se as medições na linha de base e após 24 horas estivessem dentro de 1 mm no nível de 95% (coeficientes de correlação entre medições duplicadas; r = 0,95).

Análise estatística Para detectar uma diferença média no PPD de 1,2 mm com um desvio padrão de 1,0 em um nível α de 0,05 e um nível β de 0,10 (poder = 0,9), foi necessário um tamanho de amostra de 10 pacientes. Apesar dos resultados, mas para antecipar possíveis desistências durante o estudo, um tamanho de amostra de n = 16 pacientes foi considerado.

As contagens bacterianas foram transformadas em log. Aplicou-se um modelo linear misto com a variável paciente como fator aleatório e tempo e tratamento como dois fatores fixos cruzados. Tabagismo e IP foram considerados como covariáveis. Os contrastes foram configurados para calcular a mudança da linha de base para os diferentes pontos de tempo entre os tratamentos e para cada tratamento separadamente. Foi aplicada uma correção para testes simultâneos de hipóteses de acordo com Sidak. Um gráfico de quantil normal e um gráfico de pontos residual dos valores residuais foram criados, mostrando que as suposições subjacentes ao modelo estatístico poderiam ser feitas.