Traitement parodontal non chirurgical L-PRF Plus

Matériels et méthodes Conception de l'étude et sélection des patients Un essai clinique contrôlé randomisé en bouche divisée portant sur 13 patients (8 hommes et 5 femmes, âge moyen 52,3 ± 9,4 ans) a été mis en place. Les patients ont été informés des avantages et des risques de l'étude et chaque participant a signé un consentement éclairé.

Traitement parodontal non chirurgical Un seul parodontiste (L.C.) a effectué tous les traitements parodontaux. Le NSPT consistait en deux séances de détartrage et de surfaçage radiculaire (SRP) dans les 48 heures sous anesthésie locale à l'aide d'instruments ultrasoniques et manuels. De plus, les sites associés à PPD ≥ 6 mm dans le quadrant attribué au groupe test ont été irrigués avec de l'exsudat de L-PRF et remplis de morceaux longitudinaux de membrane L-PRF. Les patients ont reçu des instructions concernant une alimentation douce, un rinçage doux et soigneux de la bouche avec de la chlorhexidine 0,12 %, et aucun brossage de dents pendant 7 jours afin d'éviter l'élimination du L-PRF. Après cette période, les instructions suivantes ont été données : technique de brossage Bass modifiée, fil dentaire et brossettes interdentaires, et rince-bouche à la chlorhexidine à 0,12 % pendant 7 jours supplémentaires. Un contrôle d'hygiène strict par le clinicien a également été effectué à chaque rendez-vous.

Préparation de la membrane L-PRF Deux échantillons de sang veineux ont été prélevés dans 2 tubes vacutainer (cupule rouge) de 10 ml sans anticoagulant. Ils ont été centrifugés à 408 g pendant 12 minutes à l'aide d'une centrifugeuse de table (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) selon le protocole décrit par Temmerman et al.18 Les caillots de L-PRF ont été retirés du tube, séparés des globules rouges et placés dans la boîte Xpression (IntraSpinTM, Intralock®, Floride, USA) pour les comprimer doucement dans des membranes. Les membranes ont été coupées en morceaux longitudinaux pour remplir les poches parodontales ≥ 6 mm. L'exsudat, libéré lors de la compression, appelé exsudat L-PRF a été aspiré pour rincer les poches traitées. (Figure 1)

Mesures cliniques Toutes les mesures cliniques ont été effectuées par un seul examinateur formé et calibré (NJ) qui était masqué pour le traitement assigné, à l'aide d'un kit d'instruments d'examen de base et d'un numéro de l'Université de Caroline du Nord. Sonde parodontale à 15 couleurs. Les paramètres cliniques suivants ont été mesurés au départ et 6 semaines, 3 mois et 6 mois après le traitement : profondeur de poche au sondage (PPD), niveau d'attache clinique (CAL), récession gingivale (GR), saignement au sondage (BOP) et O' Indice de plaque de Leary (IP).19 De plus, la sensibilité radiculaire (RS) a été évaluée à l'aide d'une échelle visuelle analogique (EVA) de 100 mm (0 indiquant aucune douleur, 50 indiquant une moyenne et 100 indiquant une douleur insupportable) à 24 heures, 6 semaines, 3 mois et 6 mois après le traitement. Le changement de PPD, CAL, GR, BOP, PI et RS (différence entre les mesures de base et à 1, 3 et 6 mois) a été calculé.

Collecte de GCF Des échantillons de GCF ont été prélevés dans la poche la plus profonde de chaque quadrant avant d'enregistrer la mesure clinique (de base, et 6 semaines et 3 mois après le traitement) afin d'évaluer la concentration de Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (P.i) et Fusobacterium nucleatum (F.n). La zone d'échantillonnage a été isolée avec des rouleaux de coton et la contamination par la salive a été évitée à l'aide d'une aspiration appropriée et d'un pulvérisateur d'air. Ensuite, une pointe de papier endodontique n ° 35 a été insérée jusqu'à ce qu'une légère résistance soit ressentie et maintenue pendant 30 secondes. Les pointes de papier ont été immédiatement insérées dans un tube Eppendorf et stockées à -80°C pour une analyse ultérieure.

Traitement microbiologique Après décongélation des échantillons, 1 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) a été ajouté et homogénéisé. Ensuite, 400 μl de chaque échantillon ont été centrifugés à 13200 rpm pendant 3 minutes. Le culot obtenu a été dispersé dans 200 µl d'InstaGene. L'ADN a été extrait avec la matrice InstaGene (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, USA) selon les instructions du fabricant. Cinq microlitres d'ADN purifié ont été utilisés pour la quantification de Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum et Prevotella intermedia. Un test quantitatif de réaction en chaîne par polymérase (qPCR) a été effectué avec un système en temps réel CFX96 (Biorad, Hercules, CA, USA) en utilisant la méthode PCR Taqman 5' nuclease assay pour la détection et la quantification de l'ADN bactérien. La réaction Taqman contenait 12,5 μl de Mastermix (Eurogentec, Seraing, Belgique), 4,5 μl d'eau distillée stérile, 1 μl d'amorces et de sonde spécifiques à l'espèce (tableau 1) et 5 μl d'ADN matrice. Les conditions de dosage pour tous les ensembles amorce/sonde consistaient en une phase initiale de 2 min à 50°C, suivie d'une étape de dénaturation pendant 10 min à 95°C, suivie de 45 cycles de 95°C pendant 15 sec et 60°C pendant 60 sec . La quantification était basée sur une courbe standard de plasmide. Le delta de la concentration bactérienne à 6 semaines, 3 et 6 mois (différence entre les mesures de base et à 6 semaines, 3 et 6 mois) a été calculé.

Randomisation, assignation secrète et étalonnage Une méthode de tirage au sort a été utilisée pour répartir les quadrants des patients en deux groupes de traitement : (SRP + L-PRF) ou contrôle (SRP seul).

Avant de commencer l'étude, deux enregistrements des paramètres suivants ont été effectués : PPD, GR et CAL chez cinq patients, avec un intervalle de 24 heures entre le premier et le deuxième enregistrement afin de valider la précision intra-examinateur. Toutes les dents, à l'exception des troisièmes molaires, ont été mesurées par sondage parodontal sur 6 sites (mésiobuccal, médiobuccal, distobuccal, mésiolingual/palatin, médiolingual/palatin et distolingual/palatin). L'étalonnage était accepté si les mesures au départ et après 24 heures étaient inférieures à 1 mm au niveau de 95 % (coefficients de corrélation entre les mesures en double ; r = 0,95).

Analyse statistique Pour détecter une différence moyenne de PPD de 1,2 mm avec un écart type de 1,0 à un niveau α de 0,05 et un niveau β de 0,10 (puissance = 0,9), une taille d'échantillon de 10 patients était nécessaire. Malgré les résultats mais pour anticiper les abandons potentiels au cours de l'étude, une taille d'échantillon de n = 16 patients a été considérée.

Les numérations bactériennes ont été transformées en log. Un modèle linéaire mixte a été appliqué avec la variable patient, comme facteur aléatoire et temps et traitement comme deux facteurs fixes croisés. Le tabagisme et l'IP ont été considérés comme des covariables. Des contrastes ont été mis en place pour calculer le changement par rapport à la ligne de base pour les différents points de temps entre les traitements et pour chaque traitement à part. Une correction pour les tests d'hypothèses simultanés selon Sidak a été appliquée. Un diagramme quantile normal et un diagramme de points résiduels des valeurs résiduelles ont été créés, montrant que les hypothèses sous-jacentes au modèle statistique pouvaient être faites.