L-PRF Plus Нехирургическое пародонтальное лечение

Материалы и методы. Дизайн исследования и отбор пациентов. Было организовано рандомизированное контролируемое клиническое исследование с разделением рта, в которое были включены 13 пациентов (8 мужчин и 5 женщин, средний возраст 52,3 ± 9,4 года). Пациенты были проинформированы о преимуществах и рисках исследования, и каждый участник подписал информированное согласие.

Нехирургическое пародонтологическое лечение Один врач-пародонтолог (L.C.) выполнял все виды пародонтологического лечения. NSPT состоял из двух сеансов скейлинга и полировки корней (SRP) в течение 48 часов под местной анестезией с использованием ультразвуковых и ручных инструментов. Кроме того, участки, связанные с PPD ≥ 6 мм в квадранте, отнесенном к тестовой группе, орошались экссудатом L-PRF и заполнялись продольными кусочками мембраны L-PRF. Пациенты получали инструкции по мягкой диете, осторожному и мягкому полосканию рта хлоргексидином 0,12% и отказу от чистки зубов в течение 7 дней во избежание удаления L-PRF. После этого периода были даны следующие инструкции: модифицированная техника чистки зубов по Бассу, зубная нить и межзубные щетки, а также полоскание рта 0,12% раствором хлоргексидина в течение дополнительных 7 дней. При каждом посещении также проводился строгий гигиенический контроль со стороны клинициста.

Подготовка мембраны L-PRF Два образца венозной крови были собраны в 2 пробирки Vacutainer (красная чашка) по 10 мл без антикоагулянта. Их центрифугировали при 408 g в течение 12 минут с использованием настольной центрифуги (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) в соответствии с протоколом, описанным Temmerman et al.18. Сгустки L-PRF удаляли из пробирки, отделяли от эритроцитов и помещали в бокс Xpression (IntraSpinTM, Intralock®, Флорида, США) для осторожного сжатия их в мембранах. Мембраны разрезали на продольные куски, чтобы заполнить пародонтальные карманы ≥ 6 мм. Экссудат, выделяющийся во время компрессии, называемый экссудатом L-PRF, отсасывали для промывания обработанных карманов. (Фигура 1)

Клинические измерения Все клинические измерения были выполнены одним обученным и сертифицированным исследователем (Н. Дж.), который был замаскирован для назначенного лечения, с использованием базового набора инструментов для обследования и номера Университета Северной Каролины. 15 пародонтальный зонд с цветовой маркировкой. Следующие клинические параметры измерялись исходно и через 6 недель, 3 месяца и 6 месяцев после лечения: глубина кармана для зондирования (PPD), уровень клинического прикрепления (CAL), рецессия десны (GR), кровоточивость при зондировании (BOP) и O´. Индекс зубного налета Лири (PI).19 Кроме того, корневую чувствительность (RS) оценивали с использованием 100-мм визуальной аналоговой шкалы (ВАШ) (0 указывает на отсутствие боли, 50 указывает на среднюю и 100 указывает на невыносимую боль) через 24 часа, 6 недель, 3 месяца и 6 месяцев после лечения. Рассчитывали изменение PPD, CAL, GR, BOP, PI и RS (разница между исходными показателями и показателями через 1, 3 и 6 месяцев).

Коллекция GCF Образцы GCF были собраны из самого глубокого кармана в каждом квадранте перед записью клинических измерений (исходный уровень, а также через 6 недель и 3 месяца после лечения) для оценки концентрации Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (Pi) и Fusobacterium nucleatum (Fn). Участок пробы изолировали ватными тампонами, а загрязнения слюной избегали с помощью соответствующего всасывания и распыления воздуха. Затем вставили эндодонтический бумажный штифт №35 до ощущения легкого сопротивления и удерживали его в течение 30 секунд. Бумажные штифты были немедленно помещены в пробирку Эппендорфа и сохранены при температуре -80ºC для последующего анализа.

Микробиологическая обработка После размораживания образцов добавляли 1 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) и гомогенизировали. Затем по 400 мкл каждого образца центрифугировали при 13200 об/мин в течение 3 минут. Полученный осадок диспергировали в 200 мкл InstaGene. ДНК экстрагировали с помощью матрицы InstaGene (Bio-Rad Life Science Research, Геркулес, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя. Пять микролитров очищенной ДНК использовали для количественного определения Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum и Prevotella intermedia. Количественный анализ полимеразной цепной реакции (кПЦР) выполняли с помощью системы реального времени CFX96 (Biorad, Hercules, CA, USA) с использованием метода ПЦР анализа 5'-нуклеазы Taqman для обнаружения и количественного определения бактериальной ДНК. Реакция Такмана содержала 12,5 мкл Mastermix (Eurogentec, Seraing, Бельгия), 4,5 мкл стерильной дистиллированной воды, 1 мкл как видоспецифичных праймеров, так и зонда (таблица 1) и 5 ​​мкл матричной ДНК. Условия анализа для всех наборов праймеров/зондов включали начальные 2 минуты при 50°C, затем этап денатурации в течение 10 минут при 95°C, затем 45 циклов при 95°C в течение 15 секунд и при 60°C в течение 60 секунд. . Количественное определение основывалось на стандартной кривой плазмиды. Рассчитывали дельту концентрации бактерий через 6 недель, 3 и 6 месяцев (разница между исходными показателями и показателями через 6 недель, 3 и 6 месяцев).

Рандомизация, сокрытие распределения и калибровка Для распределения квадрантов пациентов на две группы лечения использовался метод подбрасывания монеты: (SRP + L-PRF) или контрольная (только SRP).

Перед началом исследования были сделаны две записи следующих параметров: PPD, GR и CAL у пяти пациентов с 24-часовым интервалом между первой и второй записями, чтобы подтвердить точность результатов внутри исследователя. Все зубы, за исключением третьих моляров, были измерены с помощью периодонтального зондирования в 6 местах (мезиощечных, медиощечных, дистально-щечных, мезиоязычных/небных, медиоязычных/небных и дистальноязычных/небных). Калибровку принимали, если исходные измерения и через 24 часа были в пределах 1 мм на уровне 95% (коэффициенты корреляции между повторными измерениями; r = 0,95).

Статистический анализ Для определения средней разницы в PPD в 1,2 мм со стандартным отклонением 1,0 при уровне α 0,05 и уровне β 0,10 (мощность = 0,9) потребовалась выборка из 10 пациентов. Несмотря на результаты, но для того, чтобы предвидеть потенциальное отсев во время исследования, был рассмотрен размер выборки n = 16 пациентов.

Количество бактерий было логарифмически преобразовано. Была применена линейная смешанная модель с переменным пациентом в качестве случайного фактора и временем и лечением в виде двух скрещенных фиксированных факторов. Курение и ПИ рассматривались как копеременные. Контрасты были установлены для расчета изменения по сравнению с исходным уровнем для различных моментов времени между обработками и для каждой обработки отдельно. Применялась поправка на одновременную проверку гипотез по Сидаку. Были построены нормальный квантильный график и точечный график остаточных значений, показывающие, что допущения, лежащие в основе статистической модели, могут быть сделаны.