DNA-vaurio kriittisesti sairailla COVID-19-potilailla

Sairaaladokumentaation tiedot tallennetaan kaikista potilaista: demografiset tiedot, kliiniset tiedot (Horowitz-indeksi, pronaatioasennon tarve, avautumisliikkeet, yhteys ECMO:han, verenkierron tila ja muut elintoiminnot), laboratoriotiedot: tulehdusaktiivisuuden parametrit ja COVID-19-spesifiset markkerit (verenkuva differentiaalisella leukosyyttimäärällä, CRP, IL-6, ferritiini, prokalsitoniini, D-dimeerit).

Tutkimuksessa kerätään 4 ml heparinisoitua ääreisverta analyyttisiin tarkoituksiin, jotka ylittävät tavanomaisen käytännön lymfosyyttien eristämisen ja oksidatiivisen DNA-vaurion seurannan teho-osastolle saapumisen yhteydessä (D1), 2 päivän kuluttua (D3) ja päivänä 7 (D7). sairaalahoidosta. Samaa verinäytettä käytetään EPA- ja DHA-omega-3-määriin punasolukalvoissa. Samoin väliajoin ja tiheydellä kerätään 10 ml virtsaa 8-hydroksi-2-deoksikvanosiinin (8-OHdG) määritystä varten, joten yhteensä 30 ml virtsaa kerätään analyysitarkoituksiin.

Yksityiskohdat analyyttistä käsittelyä varten: perifeerisen veren lymfosyyttivauriot arvioidaan käyttämällä alkalista COMET ASSAY -menetelmää DNA:n rikkomiseen ja modifioitua COMET ASSAY -menetelmää käyttämällä erityisiä entsyymejä hapettuneiden emästen havaitsemiseen, endonukleaasi III:ta (ENDO III) hapettuneiden pyrimidiinien ja formamidopyrimidiini-DNA:n havaitsemiseen. glykosylaasi (FPG) hapettuneiden puriinien havaitsemiseen. Leukosyyttien korjauskapasiteetti määritetään modifioidulla COMET ASSAY:llä, joka käyttää potilaan lymfosyyttien ja HeLa-solujen uutteita, joissa on määritelty DNA-vaurio. 8-hydroksi-2-deoksikvanosiinin (8-OHdG) DNA-vaurion laajuus potilaiden virtsassa määritetään määrittämällä 8-OHdG:n pitoisuus ELISA:lla.