Daño al ADN en pacientes críticamente enfermos con COVID-19

Se registrarán datos de la documentación hospitalaria de todos los pacientes: datos demográficos, datos clínicos (índice de Horowitz, necesidad de posición de pronación, maniobras de apertura, conexión a ECMO, estado de la circulación y otras funciones de órganos), datos de laboratorio: parámetros de actividad inflamatoria y marcadores específicos de COVID-19 (hemograma con recuento diferencial de leucocitos, PCR, IL-6, ferritina, procalcitonina, dímeros D).

En el estudio, se recolectarán 4 ml de sangre periférica heparinizada con fines analíticos más allá de la práctica estándar para el aislamiento de linfocitos y el control del daño oxidativo del ADN al ingreso en la UCI (D1), después de 2 días (D3) y el día 7 (D7) de la hospitalización. La misma muestra de sangre se utilizará para determinar EPA y DHA omega-3 en las membranas de los eritrocitos. Con los mismos intervalos y frecuencia se recogerán 10 ml de orina para la determinación de 8-hidroxi-2-desoxicuanosina (8-OHdG), por lo que en total se recogerán 30 ml de orina para fines analíticos.

Detalles para el procesamiento analítico: el daño de los linfocitos de sangre periférica se evaluará utilizando el método COMET ENSAYO alcalino para la rotura del ADN y el ENSAYO COMET modificado utilizando enzimas específicas para la detección de bases oxidadas, endonucleasa III (ENDO III) para la detección de pirimidinas oxidadas y ADN de formamidopirimidina glicosilasa (FPG) para la detección de purinas oxidadas. La capacidad de reparación de los leucocitos se determinará mediante un ensayo COMET modificado, que utiliza extractos de linfocitos de pacientes y células HeLa con daño de ADN definido. La extensión del daño del ADN de 8-hidroxi-2-desoxicuanosina (8-OHdG) en la orina de los pacientes se determinará determinando la concentración de 8-OHdG mediante ELISA.