Danos no DNA em pacientes críticos com COVID-19

Os dados da documentação hospitalar serão registrados para todos os pacientes: dados demográficos, dados clínicos (índice de Horowitz, necessidade de posição de pronação, manobras de abertura, conexão com ECMO, estado da circulação e outras funções de órgãos), dados laboratoriais: parâmetros de atividade inflamatória e marcadores específicos de COVID-19 (hemograma com contagem diferencial de leucócitos, PCR, IL-6, ferritina, procalcitonina, D-dímeros).

No estudo, 4 ml de sangue periférico heparinizado serão coletados para fins analíticos além da prática padrão para isolamento de linfócitos e monitoramento de dano oxidativo ao DNA na admissão na UTI (D1), após 2 dias (D3) e no dia 7 (D7) da internação. A mesma amostra de sangue será usada para determinar EPA e DHA ômega-3 nas membranas dos eritrócitos. Com os mesmos intervalos e frequência, serão coletados 10 ml de urina para dosagem de 8-hidroxi-2-desoxiquanosina (8-OHdG), totalizando 30 ml de urina para fins analíticos.

Detalhes para processamento analítico: os danos nos linfócitos do sangue periférico serão avaliados usando o método COMET ASSAY alcalino para quebra de DNA e COMET ASSAY modificado usando enzimas específicas para a detecção de bases oxidadas, endonuclease III (ENDO III) para a detecção de pirimidinas oxidadas e formamidopirimidina DNA glicosilase (FPG) para a detecção de purinas oxidadas. A capacidade de reparo de leucócitos será determinada usando um COMET ASSAY modificado, que usa extratos de linfócitos de pacientes e células HeLa com dano de DNA definido. A extensão do dano ao DNA da 8-hidroxi-2-desoxiquanosina (8-OHdG) na urina dos pacientes será determinada pela determinação da concentração de 8-OHdG por ELISA.