Повреждение ДНК у пациентов с COVID-19 в критическом состоянии

Данные из больничной документации будут записываться для всех пациентов: демографические данные, клинические данные (индекс Горовица, необходимость положения пронации, открывающие маневры, подключение к ЭКМО, состояние кровообращения и других функций органов), лабораторные данные: параметры воспалительной активности и специфические маркеры COVID-19 (анализ крови с дифференциальным подсчетом лейкоцитов, CRP, IL-6, ферритин, прокальцитонин, D-димеры).

В исследовании будет собрано 4 мл гепаринизированной периферической крови для аналитических целей, выходящих за рамки стандартной практики выделения лимфоцитов и мониторинга окислительного повреждения ДНК при поступлении в отделение интенсивной терапии (D1), через 2 дня (D3) и на 7 день (D7). госпитализации. Тот же образец крови будет использоваться для определения омега-3 ЭПК и ДГК в мембранах эритроцитов. С той же периодичностью и периодичностью будет собираться 10 мл мочи для определения 8-гидрокси-2-дезоксикванозина (8-OHdG), так что всего для аналитических целей будет собрано 30 мл мочи.

Детали для аналитической обработки: повреждение лимфоцитов периферической крови будет оцениваться с использованием щелочного метода COMET ASSAY для выявления разрывов ДНК и модифицированного COMET ASSAY с использованием специфических ферментов для обнаружения окисленных оснований, эндонуклеазы III (ENDO III) для обнаружения окисленных пиримидинов и формамидопиримидиновой ДНК. гликозилазы (FPG) для обнаружения окисленных пуринов. Способность к восстановлению лейкоцитов будет определяться с использованием модифицированного COMET ASSAY, в котором используются экстракты лимфоцитов пациента и клеток HeLa с определенным повреждением ДНК. Степень повреждения ДНК 8-гидрокси-2-дезоксикванозином (8-OHdG) в моче пациентов будет определяться путем определения концентрации 8-OHdG с помощью ELISA.