DNA-schade bij ernstig zieke COVID-19-patiënten

Gegevens uit ziekenhuisdocumentatie zullen voor alle patiënten worden geregistreerd: demografische gegevens, klinische gegevens (Horowitz-index, de noodzaak van pronatiepositie, openingsmanoeuvres, verbinding met ECMO, toestand van de bloedsomloop en andere orgaanfuncties), laboratoriumgegevens: parameters van ontstekingsactiviteit en COVID-19-specifieke markers (bloedbeeld met differentieel aantal leukocyten, CRP, IL-6, ferritine, procalcitonine, D-dimeren).

In het onderzoek zal 4 ml gehepariniseerd perifeer bloed worden verzameld voor analytische doeleinden buiten de standaard praktijk voor lymfocytenisolatie en monitoring van oxidatieve DNA-schade bij opname op de ICU (D1), na 2 dagen (D3) en op dag 7 (D7). van de ziekenhuisopname. Hetzelfde bloedmonster zal worden gebruikt om EPA en DHA omega-3 in erytrocytenmembranen te bepalen. Met dezelfde tussenpozen en frequentie wordt 10 ml urine verzameld voor de bepaling van 8-hydroxy-2-deoxyquanosine (8-OHdG), dus in totaal wordt 30 ml urine verzameld voor analytische doeleinden.

Details voor analytische verwerking: schade aan perifere bloedlymfocyten zal worden beoordeeld met behulp van de alkalische COMET ASSAY-methode voor DNA-breuk en gemodificeerde COMET ASSAY met behulp van specifieke enzymen voor de detectie van geoxideerde basen, endonuclease III (ENDO III) voor de detectie van geoxideerde pyrimidines en formamidopyrimidine-DNA glycosylase (FPG) voor de detectie van geoxideerde purines. Het herstelvermogen van leukocyten zal worden bepaald met behulp van een gemodificeerde COMET ASSAY, waarbij gebruik wordt gemaakt van extracten van patiëntlymfocyten en HeLa-cellen met gedefinieerde DNA-schade. De mate van 8-hydroxy-2-deoxyquanosine (8-OHdG) DNA-schade in de urine van patiënten zal worden bepaald door de concentratie van 8-OHdG te bepalen met behulp van ELISA.