DNA-skader hos kritisk syge COVID-19-patienter

Data fra hospitalsdokumentation vil blive registreret for alle patienter: demografiske data, kliniske data (Horowitz-indeks, nødvendigheden af ​​pronationsposition, åbningsmanøvrer, forbindelse til ECMO, kredsløbstilstand og andre organfunktioner), laboratoriedata: parametre for inflammatorisk aktivitet og COVID-19 specifikke markører (blodtal med differentielt leukocyttal, CRP, IL-6, ferritin, procalcitonin, D-dimerer).

I undersøgelsen vil 4 ml hepariniseret perifert blod blive indsamlet til analytiske formål ud over standardpraksis til lymfocytisolering og monitorering af oxidativ DNA-skade ved indlæggelse på intensivafdelingen (D1), efter 2 dage (D3) og på dag 7 (D7). af indlæggelsen. Den samme blodprøve vil blive brugt til at bestemme EPA og DHA omega-3 i erytrocytmembraner. Med samme intervaller og hyppighed vil der blive opsamlet 10 ml urin til bestemmelse af 8-hydroxy-2-deoxyquanosin (8-OHdG), så der vil blive opsamlet i alt 30 ml urin til analyseformål.

Detaljer for analytisk behandling: beskadigelse af lymfocytter i perifert blod vil blive vurderet ved hjælp af den alkaliske COMET ASSAY-metode til DNA-brud og modificeret COMET ASSAY ved anvendelse af specifikke enzymer til påvisning af oxiderede baser, endonuklease III (ENDO III) til påvisning af oxiderede pyrimidiner og formamidopyrimidin-DNA glycosylase (FPG) til påvisning af oxiderede puriner. Leukocytreparationskapacitet vil blive bestemt ved hjælp af en modificeret COMET ASSAY, som bruger ekstrakter af patientens lymfocytter og HeLa-celler med defineret DNA-skade. Omfanget af 8-hydroxy-2-deoxyquanosin (8-OHdG) DNA-skade i patientens urin vil blive bestemt ved at bestemme koncentrationen af ​​8-OHdG ved ELISA.