DNA-skade hos kritisk syke COVID-19-pasienter

Data fra sykehusdokumentasjon vil bli registrert for alle pasienter: demografiske data, kliniske data (Horowitz-indeks, nødvendigheten av pronasjonsposisjon, åpningsmanøvrer, tilkobling til ECMO, sirkulasjonstilstand og andre organfunksjoner), laboratoriedata: parametere for inflammatorisk aktivitet og COVID-19-spesifikke markører (blodtelling med differensiell leukocytttelling, CRP, IL-6, ferritin, prokalsitonin, D-dimerer).

I studien vil 4 ml heparinisert perifert blod samles inn for analytiske formål utover standard praksis for lymfocyttisolering og overvåking av oksidativ DNA-skade ved innleggelse på intensivavdelingen (D1), etter 2 dager (D3) og på dag 7 (D7). av sykehusinnleggelsen. Den samme blodprøven vil bli brukt til å bestemme EPA og DHA omega-3 i erytrocyttmembraner. Ved samme intervaller og hyppighet vil det samles opp 10 ml urin for bestemmelse av 8-hydroksy-2-deoksykvanosin (8-OHdG), så totalt 30 ml urin vil bli samlet inn for analyseformål.

Detaljer for analytisk prosessering: skade på perifere blodlymfocytter vil bli vurdert ved bruk av den alkaliske COMET ASSAY-metoden for DNA-brudd og modifisert COMET ASSAY ved bruk av spesifikke enzymer for påvisning av oksiderte baser, endonuklease III (ENDO III) for påvisning av oksiderte pyrimidiner og formamidopyrimidin-DNA glykosylase (FPG) for påvisning av oksiderte puriner. Leukocyttreparasjonskapasitet vil bli bestemt ved hjelp av en modifisert COMET ASSAY, som bruker ekstrakter av pasientlymfocytter og HeLa-celler med definert DNA-skade. Omfanget av 8-hydroksy-2-deoksykvanosin (8-OHdG) DNA-skade i pasientens urin vil bli bestemt ved å bestemme konsentrasjonen av 8-OHdG ved ELISA.