Danni al DNA in pazienti con COVID-19 in condizioni critiche

Per tutti i pazienti verranno registrati i dati della documentazione ospedaliera: dati demografici, dati clinici (indice di Horowitz, necessità della posizione di pronazione, manovre di apertura, connessione all'ECMO, stato della circolazione e altre funzioni degli organi), dati di laboratorio: parametri dell'attività infiammatoria e marcatori specifici di COVID-19 (emocromo con conta leucocitaria differenziale, CRP, IL-6, ferritina, procalcitonina, D-dimeri).

Nello studio, verranno raccolti 4 ml di sangue periferico eparinizzato per scopi analitici oltre la pratica standard per l'isolamento dei linfociti e il monitoraggio del danno ossidativo del DNA al momento del ricovero in terapia intensiva (D1), dopo 2 giorni (D3) e il giorno 7 (D7) del ricovero. Lo stesso campione di sangue verrà utilizzato per determinare EPA e DHA omega-3 nelle membrane degli eritrociti. Con la stessa cadenza e frequenza verranno raccolti 10 ml di urina per la determinazione dell'8-idrossi-2-deossiquanosina (8-OHdG), per un totale di 30 ml di urina a scopo analitico.

Dettagli per l'elaborazione analitica: il danno linfocitario del sangue periferico sarà valutato utilizzando il metodo alcalino COMET ASSAY per la rottura del DNA e COMET ASSAY modificato utilizzando enzimi specifici per la rilevazione di basi ossidate, endonucleasi III (ENDO III) per la rilevazione di pirimidine ossidate e DNA di formamidopirimidina glicosilasi (FPG) per la rilevazione delle purine ossidate. La capacità di riparazione dei leucociti sarà determinata utilizzando un COMET ASSAY modificato, che utilizza estratti di linfociti di pazienti e cellule HeLa con danno al DNA definito. L'entità del danno al DNA dell'8-idrossi-2-deossiquanosina (8-OHdG) nelle urine dei pazienti sarà determinata determinando la concentrazione di 8-OHdG mediante ELISA.