DNA-skador hos kritiskt sjuka covid-19-patienter

Data från sjukhusdokumentation kommer att registreras för alla patienter: demografiska data, kliniska data (Horowitz-index, nödvändigheten av pronationsposition, öppningsmanövrar, anslutning till ECMO, tillstånd för cirkulationen och andra organfunktioner), laboratoriedata: parametrar för inflammatorisk aktivitet och COVID-19-specifika markörer (blodantal med differentiellt leukocytantal, CRP, IL-6, ferritin, prokalcitonin, D-dimerer).

I studien kommer 4 ml hepariniserat perifert blod att samlas in för analytiska ändamål utöver standardpraxis för lymfocytisolering och övervakning av oxidativ DNA-skada vid inläggning på ICU (D1), efter 2 dagar (D3) och på dag 7 (D7). av sjukhusvistelsen. Samma blodprov kommer att användas för att bestämma EPA och DHA omega-3 i erytrocytmembran. Med samma intervall och frekvens kommer 10 ml urin att samlas upp för bestämning av 8-hydroxi-2-deoxiquanosin (8-OHdG), så totalt 30 ml urin kommer att samlas upp för analytiska ändamål.

Detaljer för analytisk bearbetning: skada på lymfocyter i perifert blod kommer att bedömas med den alkaliska COMET ASSAY-metoden för DNA-brytning och modifierad COMET ASSAY med användning av specifika enzymer för detektion av oxiderade baser, endonukleas III (ENDO III) för detektion av oxiderade pyrimidiner och formamidopyrimidin-DNA glykosylas (FPG) för detektion av oxiderade puriner. Leukocytreparationskapacitet kommer att bestämmas med hjälp av en modifierad COMET ASSAY, som använder extrakt av patientens lymfocyter och HeLa-celler med definierad DNA-skada. Omfattningen av 8-hydroxi-2-deoxiquanosin (8-OHdG) DNA-skada i patientens urin kommer att bestämmas genom att bestämma koncentrationen av 8-OHdG med ELISA.