Uszkodzenia DNA u krytycznie chorych pacjentów z COVID-19

Dane z dokumentacji szpitalnej będą rejestrowane dla wszystkich pacjentów: dane demograficzne, dane kliniczne (indeks Horowitza, konieczność ustawienia pozycji pronacyjnej, manewry otwarcia, podłączenie do ECMO, stan krążenia i inne funkcje narządów), dane laboratoryjne: parametry aktywności zapalnej oraz markery specyficzne dla COVID-19 (morfologia krwi z różnicowaniem liczby leukocytów, CRP, IL-6, ferrytyna, prokalcytonina, D-dimery).

W badaniu zostanie pobrane 4 ml heparynizowanej krwi obwodowej do celów analitycznych wykraczających poza standardową praktykę izolacji limfocytów i monitorowania oksydacyjnego uszkodzenia DNA po przyjęciu na OIT (D1), po 2 dniach (D3) i 7 dniu (D7) hospitalizacji. Ta sama próbka krwi zostanie wykorzystana do oznaczenia kwasów omega-3 EPA i DHA w błonach erytrocytów. W tych samych odstępach czasu iz taką samą częstotliwością będzie pobierane 10 ml moczu w celu oznaczenia 8-hydroksy-2-deoksykwanozyny (8-OHdG), a więc w sumie 30 ml moczu zostanie pobrane do celów analitycznych.

Szczegóły opracowania analitycznego: uszkodzenie limfocytów krwi obwodowej zostanie ocenione zasadową metodą COMET ASSAY do łamania DNA oraz zmodyfikowaną metodą COMET ASSAY z użyciem specyficznych enzymów do wykrywania utlenionych zasad, endonukleazy III (ENDO III) do wykrywania utlenionych pirymidyn i formamidopirymidynowego DNA glikozylaza (FPG) do wykrywania utlenionych puryn. Zdolność naprawcza leukocytów zostanie określona za pomocą zmodyfikowanego testu COMET ASSAY, w którym wykorzystuje się ekstrakty limfocytów pacjenta i komórek HeLa ze zdefiniowanym uszkodzeniem DNA. Stopień uszkodzenia DNA 8-hydroksy-2-deoksykwanozyny (8-OHdG) w moczu pacjentów zostanie określony poprzez oznaczenie stężenia 8-OHdG metodą ELISA.