Lactamica 9: Neisseria Lactamica -rokotus myöhäisessä raskaudessa

Suunnittelemme nenärokotuksen N. lactamicalla (villityyppinen kanta Y92-1009) terveille raskaana oleville naisille, jotta selvitettäisiin, tapahtuuko vaakasuuntaista N. lactamican siirtymistä vastasyntyneisiin ja karakterisoidaan vaikutus kehittyviin vastasyntyneen ylempiin hengitysteihin (URT). ) mikrobiomi. Jos tämä tutkimus onnistuu, se tarjoaa uuden mallin vastasyntyneiden luonnollisen kolonisaatiotapahtuman indusoimiseksi ja vangitsemiseksi. Toisin kuin perinteiset kontrolloidut ihmisen infektiomallit, jotka kuvaavat rokotuksen aiheuttamaa kolonisaatiota, tämä ensimmäinen ihmisessä -malli tutkii ihmisestä ihmiseen tapahtuvaa kommensaalista leviämistä, mikä mahdollistaa mikrobiomien muutosten ja mukautuvan kommensaalisen mikroevoluution vertailun äiti-vauva-pareissa. Olemme jo tehneet asiaankuuluvaa potilas- ja yleisön osallistumista koskevaa tutkimusta, jossa kaikki 12 haastateltua raskaana olevaa naista ilmoittivat hyväksyvänsä ehdotetun tutkimuksen, ja 11 ilmoitti, että he olisivat olleet kiinnostuneita osallistumaan tällaiseen tutkimukseen.

Lähestymme terveitä raskaana olevia naisia ​​toisella ja kolmannella raskauskolmanneksella. Kelpoisuusseulonta ja ilmoittautuminen suoritetaan raskausviikolla 34+0 - 36+6, ja 20 naiselle (jota ei ole jo kolonisoitu N. lactamica -bakteerilla) rokotetaan nenän kautta 10^5 pesäkettä muodostavaa yksikköä N. lactamica Y92-1009 ikä 36+ 0-37+6 raskausviikkoa. Näytteet otetaan uusilta äideiltä (nenänielun, suunielun ja sylki) ja heidän vastasyntyneiltä (nenänielun ja sylki) 1 päivä, 1 viikko, 1 kuukausi ja 4 kuukautta synnytyksen jälkeen. Mikäli mahdollista, ja vapaaehtoisen suostumuksella, otamme napanuoraverinäytteen synnytyksen yhteydessä ja pikkulasten laskimoverinäytteen 1 kuukauden ja 4 kuukauden kuluttua synnytyksestä varastointia ja käyttöä varten tulevissa tutkimuksissa. Otamme myös äidin laskimoverinäytteen 4 kuukautta synnytyksen jälkeen sekä sylkipyyhkäisyn kaikilta alle 5-vuotiailta kontakteilta. Seulonnassa tunnistettuja luonnollisia N. lactamica -kantajia ei rokoteta, vaan niitä seurataan vastasyntyneiden kanssa biologista näytteenottoa varten.

Nielu- ja sylkipyyhkeet suspendoidaan säilytysväliaineeseen, jaetaan eriin ja säilytetään -80 °C:ssa. N. lactamica -kolonisaatio vahvistetaan käyttämällä selektiivistä agaria, Gram-värjäystä, mikroskopiaa ja analyyttistä profiiliindeksitestausta (ja matriisiavusteista laserdesorptio/ionisaatiolentoaikaa epäselvien tulosten saamiseksi). N. lactamica -bakteerin kolonisaatiotiheys määritetään, isolaatteja säilytetään -80 °C:ssa ja Y92-1009-kannan identiteetti varmistetaan käyttämällä kohdennettua polymeraasiketjureaktiota (PCR).

Mikrobiomianalyysi suoritetaan sulatetuille näytteille parillisista äiti-vastasyntyneen näytteistä DNA-uutolla, 16S ribosomaalisen ribonukleiinihapon (rRNA) geenin PCR:llä ja amplikonisekvensoinnilla. Huonolaatuiset ja kimeeriset sekvenssilukemat poistetaan, ja korkealaatuiset lukemat leikataan, kohdistetaan ja ryhmitellään taksonomista luokittelua ja tilastollista analyysiä varten.

Parilliset äidin ja vastasyntyneen isolaatit, jotka on vahvistettu N. lactamica Y92-1009:ksi, sekvensoidaan ja tuloksena saadut genomit kartoitetaan täydelliseen N. lactamica Y92-1009:n suljettuun referenssigenomiin, jotta voidaan arvioida todisteita erillisestä mikroevoluutiosta.

Vertailemme myös parillisia mikrobiomiprofiileja tunnistaaksemme ehdokasorganismeja, joita esiintyy äideissä ja heidän vauvoissaan. Parilliset äidin ja vastasyntyneen näytealikvootit sulatetaan ja maljataan valikoivalle alustalle, ja ehdokaslajien isolaatit tunnistetaan Gram-värjäyksellä, mikroskopialla ja muilla asiaankuuluvilla mikrobiologisilla testeillä. Tuloksena saadut isolaatit sekvensoidaan ja analysoidaan todisteiden saamiseksi rasituksen jakautumisesta äitien ja heidän vastasyntyneidensä välillä, mikä viittaa horisontaaliseen siirtymiseen.