Lactamica 9: Neisseria Lactamica Inokulasjon i sen graviditet

Vi planlegger å utføre nasal inokulering med N. lactamica (villtype stamme Y92-1009) hos friske gravide kvinner, for å fastslå om horisontal N. lactamica-overføring til deres nyfødte skjer, og for å karakterisere påvirkningen på de utviklende neonatale øvre luftveiene (URT) ) mikrobiom. Hvis den lykkes, vil denne studien gi en ny modell for å indusere og fange en naturlig koloniseringshendelse hos nyfødte. I motsetning til tradisjonelle kontrollerte humane infeksjonsmodeller, som fanger opp inokulasjonsindusert kolonisering, ville denne første-i-mann-modellen studere person-til-person kommensal overføring, noe som tillater sammenligning av mikrobiometdringer og adaptiv kommensal mikroevolusjon i mor-spedbarn-par. Vi har allerede utført relevant forskning på pasient og offentlig involvering, der alle de 12 gravide kvinnene som ble intervjuet rapporterte godkjenning for denne foreslåtte studien, og 11 ga uttrykk for at de ville vært interessert i å delta i en slik studie.

Vi vil nærme oss friske gravide kvinner i andre og tredje trimester av svangerskapet. Kvalifikasjonsscreening og påmelding vil finne sted ved 34+0 til 36+6 ukers svangerskap, og 20 kvinner (ikke allerede kolonisert med N. lactamica) vil bli inokulert nasalt med 10^5 kolonidannende enheter N. lactamica Y92-1009 ved 36+ 0 til 37+6 uker svangerskap. Prøver vil bli tatt fra nybakte mødre (nasofaryngeal, orofaryngeal og spytt) og deres nyfødte (nasopharyngeal og spytt) 1 dag, 1 uke, 1 måned og 4 måneder etter fødselen. Hvis det er mulig, og med frivillighetens samtykke, vil vi samle en navlestrengsblodprøve ved fødsel og en venøs blodprøve hos spedbarn 1 måned og 4 måneder etter fødselen, for oppbevaring og bruk i fremtidige studier. Vi vil også ta en venøs blodprøve fra mor 4 måneder etter fødselen, samt en spyttpinne fra alle husholdningskontakter under 5 år. Eventuelle naturlige N. lactamica-bærere identifisert ved screening vil ikke bli inokulert, men vil bli fulgt opp med deres nyfødte for biologisk prøvetaking.

Svelg- og spyttprøver vil bli suspendert i lagringsmedium, alikvotert og lagret ved -80°C. N. lactamica-kolonisering vil bli bekreftet ved bruk av selektiv agar, Gram-farging, mikroskopi og analytisk profilindekstesting (og matriseassistert laserdesorpsjon/ioniseringstid-of-flight for usikre resultater). N. lactamica koloniseringstetthet vil kvantifiseres, isolater vil bli lagret ved -80°C, og Y92-1009 stammeidentitet vil bli bekreftet ved bruk av målrettet polymerasekjedereaksjon (PCR).

Mikrobiomanalyse vil bli utført på tinte alikvoter av parede mor-neonate prøver, ved DNA-ekstraksjon, 16S ribosomal ribonukleinsyre (rRNA) gen-PCR og amplikonsekvensering. Dårlig kvalitet og kimære sekvensavlesninger vil bli fjernet, og avlesninger av høy kvalitet vil bli trimmet, justert og gruppert for taksonomisk klassifisering og statistisk analyse.

Parede maternelle og neonatale isolater bekreftet som N. lactamica Y92-1009 vil bli sekvensert, og resulterende genomer vil bli kartlagt til et komplett N. lactamica Y92-1009 lukket referansegenom, for å vurdere bevis på distinkt mikroevolusjon.

Vi vil også sammenligne sammenkoblede mikrobiomprofiler for å identifisere kandidatorganismer som finnes hos mødre og deres spedbarn. Parede prøvealikvoter fra mor og nyfødte vil bli tint og belagt på selektive medier, og isolater av kandidatarter vil bli identifisert ved hjelp av Gram-farging, mikroskopi og andre relevante mikrobiologiske tester. Resulterende isolater vil bli sekvensert og analysert for bevis på belastningsdeling mellom mødre og deres nyfødte, noe som tyder på horisontal overføring.