Lactamica 9: Inoculação de Neisseria Lactamica no final da gravidez

Planejamos realizar a inoculação nasal com N. lactamica (cepa selvagem Y92-1009) em mulheres grávidas saudáveis, para estabelecer se ocorre transferência horizontal de N. lactamica para seus neonatos e caracterizar o impacto no desenvolvimento do trato respiratório superior neonatal (URT ) microbioma. Se for bem-sucedido, este estudo fornecerá um novo modelo para induzir e capturar um evento de colonização natural em recém-nascidos. Ao contrário dos modelos tradicionais de infecção humana controlada, que capturam a colonização induzida por inoculação, este primeiro modelo no homem estudaria a transmissão comensal de pessoa para pessoa, permitindo a comparação das alterações do microbioma e da microevolução comensal adaptativa em pares mãe-bebê. Já realizamos uma pesquisa relevante de Paciente e Envolvimento Público, na qual todas as 12 gestantes entrevistadas relataram aprovação para este estudo proposto, e 11 expressaram que teriam interesse em participar de tal estudo.

Abordaremos gestantes saudáveis ​​no segundo e terceiro trimestres de gestação. A triagem de elegibilidade e a inscrição ocorrerão em 34+0 a 36+6 semanas de gestação, e 20 mulheres (ainda não colonizadas com N. lactamica) serão inoculadas por via nasal com 10^5 unidades formadoras de colônias N. lactamica Y92-1009 em 36+ 0 a 37+6 semanas de gestação. Amostras serão obtidas das puérperas (nasofaríngea, orofaríngea e saliva) e de seus neonatos (nasofaríngeo e saliva) em 1 dia, 1 semana, 1 mês e 4 meses pós-parto. Se possível, e com o consentimento da voluntária, coletaremos uma amostra de sangue de cordão umbilical no momento do parto e uma amostra de sangue venoso infantil 1 mês e 4 meses pós-parto, para armazenamento e uso em estudos futuros. Também coletaremos uma amostra de sangue venoso materno aos 4 meses pós-parto, bem como um swab de saliva de quaisquer contatos domiciliares com menos de 5 anos. Quaisquer portadores naturais de N. lactamica identificados na triagem não serão inoculados, mas serão acompanhados com seus neonatos para amostragem biológica.

Swabs faríngeos e de saliva serão suspensos em meio de armazenamento, aliquotados e armazenados a -80°C. A colonização de N. lactamica será confirmada usando ágar seletivo, coloração de Gram, microscopia e teste de índice de perfil analítico (e tempo de voo de dessorção/ionização a laser assistida por matriz para resultados inconclusivos). A densidade de colonização de N. lactamica será quantificada, os isolados serão armazenados a -80°C e a identidade da cepa Y92-1009 será confirmada usando reação em cadeia da polimerase direcionada (PCR).

A análise do microbioma será realizada em alíquotas descongeladas de amostras pareadas mãe-neonato, por extração de DNA, PCR do gene do ácido ribonucléico ribossômico 16S (rRNA) e sequenciamento de amplicon. As leituras de sequência quimérica e de baixa qualidade serão removidas e as leituras de alta qualidade serão cortadas, alinhadas e agrupadas para classificação taxonômica e análise estatística.

Isolados maternos e neonatais emparelhados confirmados como N. lactamica Y92-1009 serão sequenciados, e os genomas resultantes serão mapeados para um genoma completo de referência fechado de N. lactamica Y92-1009, para avaliar a evidência de microevolução distinta.

Também compararemos perfis de microbiomas pareados para identificar organismos candidatos que estão presentes em mães e seus bebês. Alíquotas pareadas de amostra mãe-neonato serão descongeladas e semeadas em meio seletivo, e isolados de espécies candidatas serão identificados usando coloração de Gram, microscopia e outros testes microbiológicos relevantes. Os isolados resultantes serão sequenciados e analisados ​​quanto à evidência de compartilhamento de tensão entre as mães e seus neonatos, sugerindo transferência horizontal.