Lactamica 9: прививка Neisseria Lactamica на поздних сроках беременности

Мы планируем провести назальную инокуляцию N. lactamica (штамм дикого типа Y92-1009) у здоровых беременных женщин, чтобы установить, происходит ли горизонтальный перенос N. lactamica их новорожденным, и охарактеризовать влияние на развивающиеся у новорожденных верхние дыхательные пути (ВДП). ) микробиом. В случае успеха это исследование предоставит новую модель для индуцирования и регистрации естественного события колонизации у новорожденных. В отличие от традиционных моделей контролируемых инфекций человека, которые фиксируют колонизацию, вызванную прививкой, эта первая модель на человеке будет изучать комменсальную передачу от человека к человеку, позволяя сравнивать изменения микробиома и адаптивную комменсальную микроэволюцию в парах мать-младенец. Мы уже провели соответствующее исследование с участием пациентов и общественности, в ходе которого все 12 опрошенных беременных женщин сообщили об одобрении этого предлагаемого исследования, а 11 заявили, что они были бы заинтересованы в участии в таком исследовании.

Мы подойдем к здоровым беременным женщинам во втором и третьем триместрах беременности. Скрининг на соответствие требованиям и зачисление будут проводиться на сроке беременности от 34+0 до 36+6 недель, и 20 женщинам (еще не колонизированным N. lactamica) будут назально привиты 10^5 колониеобразующих единиц N. lactamica Y92-1009 в возрасте 36+. от 0 до 37+6 недель беременности. Образцы будут получены от новых матерей (носоглотки, ротоглотки и слюны) и их новорожденных (носоглотки и слюны) через 1 день, 1 неделю, 1 месяц и 4 месяца после родов. Если возможно и с согласия добровольца, мы возьмем образец пуповинной крови при родах и образец венозной крови младенца через 1 месяц и 4 месяца после родов для хранения и использования в будущих исследованиях. Мы также возьмем образец венозной крови матери через 4 месяца после родов, а также мазок слюны у любых бытовых контактов в возрасте до 5 лет. Любые естественные носители N. lactamica, выявленные при скрининге, не будут инокулированы, но их новорожденные будут обследованы для взятия биологических образцов.

Мазки из зева и слюны суспендируют в среде для хранения, делят на аликвоты и хранят при температуре -80°C. Колонизация N. lactamica будет подтверждена с помощью селективного агара, окрашивания по Граму, микроскопии и анализа индекса аналитического профиля (и времени пролета лазерной десорбции/ионизации с использованием матрицы для неубедительных результатов). Будет определена плотность колонизации N. lactamica, изоляты будут храниться при температуре -80°C, а идентичность штамма Y92-1009 будет подтверждена с помощью направленной полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Анализ микробиома будет выполняться на размороженных аликвотах парных образцов матери и новорожденного путем выделения ДНК, ПЦР с геном 16S рибосомальной рибонуклеиновой кислоты (рРНК) и секвенирования ампликона. Прочтения низкого качества и химерных последовательностей будут удалены, а прочтения высокого качества будут обрезаны, выровнены и сгруппированы для таксономической классификации и статистического анализа.

Парные материнские и неонатальные изоляты, подтвержденные как N. lactamica Y92-1009, будут секвенированы, а полученные геномы будут сопоставлены с полным закрытым эталонным геномом N. lactamica Y92-1009, чтобы оценить доказательства отдельной микроэволюции.

Мы также сравним парные профили микробиома, чтобы идентифицировать микроорганизмы-кандидаты, которые присутствуют у матерей и их младенцев. Парные аликвоты образцов матери и новорожденного будут разморожены и высеяны на селективную среду, а изоляты видов-кандидатов будут идентифицированы с помощью окрашивания по Граму, микроскопии и других соответствующих микробиологических тестов. Полученные изоляты будут секвенированы и проанализированы на наличие признаков общего штамма между матерями и их новорожденными, что предполагает горизонтальный перенос.