Lactamica 9: Inoculazione di Neisseria Lactamica nella tarda gravidanza

Intendiamo eseguire l'inoculazione nasale con N. lactamica (ceppo selvatico Y92-1009) in donne gravide sane, per stabilire se si verifica il trasferimento orizzontale di N. lactamica ai loro neonati e per caratterizzare l'impatto sullo sviluppo del tratto respiratorio superiore neonatale (URT ) microbioma. In caso di successo, questo studio fornirà un nuovo modello per indurre e catturare un evento di colonizzazione naturale nei neonati. A differenza dei tradizionali modelli di infezione umana controllata, che catturano la colonizzazione indotta dall'inoculazione, questo modello first-in-man studierebbe la trasmissione commensale da persona a persona, consentendo il confronto dei cambiamenti del microbioma e della microevoluzione commensale adattiva nelle coppie madre-bambino. Abbiamo già condotto una ricerca pertinente sul coinvolgimento del paziente e del pubblico, in cui tutte le 12 donne incinte intervistate hanno dichiarato di approvare questo studio proposto e 11 hanno espresso che sarebbero state interessate a prendere parte a tale studio.

Ci avvicineremo a donne incinte sane nel loro secondo e terzo trimestre di gravidanza. Lo screening e l'arruolamento per l'idoneità avverranno tra le 34+0 e le 36+6 settimane di gestazione e 20 donne (non già colonizzate con N. lactamica) saranno inoculate per via nasale con 10^5 unità formanti colonia N. lactamica Y92-1009 a 36+ Da 0 a 37+6 settimane di gestazione. I campioni saranno prelevati da neomamme (nasofaringee, orofaringee e saliva) e dai loro neonati (nasofaringei e saliva) a 1 giorno, 1 settimana, 1 mese e 4 mesi dopo il parto. Se possibile, e con il consenso del volontario, raccoglieremo un campione di sangue del cordone ombelicale al momento del parto e un campione di sangue venoso infantile a 1 mese e 4 mesi dopo il parto, per la conservazione e l'utilizzo in studi futuri. Raccoglieremo anche un campione di sangue venoso materno a 4 mesi dopo il parto, nonché un tampone di saliva da tutti i contatti familiari di età inferiore ai 5 anni. Eventuali portatori naturali di N. lactamica identificati allo screening non saranno inoculati, ma saranno seguiti con i loro neonati per il campionamento biologico.

I tamponi faringei e salivari saranno sospesi in medium di conservazione, aliquotati e conservati a -80°C. La colonizzazione da N. lactamica sarà confermata mediante agar selettivo, colorazione di Gram, microscopia e test dell'indice del profilo analitico (e tempo di volo di desorbimento/ionizzazione laser assistito da matrice per risultati non conclusivi). La densità di colonizzazione di N. lactamica sarà quantificata, gli isolati saranno conservati a -80°C e l'identità del ceppo Y92-1009 sarà confermata mediante reazione a catena della polimerasi mirata (PCR).

L'analisi del microbioma sarà eseguita su aliquote scongelate di campioni accoppiati madre-neonato, mediante estrazione del DNA, PCR del gene dell'acido ribonucleico ribosomiale 16S (rRNA) e sequenziamento dell'amplicone. Le letture di sequenza chimerica e di scarsa qualità verranno rimosse e le letture di alta qualità verranno ritagliate, allineate e raggruppate per la classificazione tassonomica e l'analisi statistica.

Gli isolati materni e neonatali accoppiati confermati come N. lactamica Y92-1009 saranno sequenziati e i genomi risultanti saranno mappati su un genoma di riferimento chiuso completo di N. lactamica Y92-1009, per valutare l'evidenza di microevoluzione distinta.

Confronteremo anche i profili di microbioma accoppiati per identificare gli organismi candidati presenti nelle madri e nei loro bambini. Aliquote di campioni accoppiati madre-neonato saranno scongelate e piastrate su terreni selettivi e gli isolati di specie candidate saranno identificati mediante colorazione di Gram, microscopia e altri test microbiologici pertinenti. Gli isolati risultanti saranno sequenziati e analizzati per l'evidenza della condivisione del ceppo tra madri e neonati, suggerendo un trasferimento orizzontale.