Lactamica 9: Inoculación de Neisseria Lactamica al final del embarazo

Planeamos realizar una inoculación nasal con N. lactamica (cepa de tipo salvaje Y92-1009) en mujeres embarazadas sanas, para establecer si se produce una transferencia horizontal de N. lactamica a sus recién nacidos y para caracterizar el impacto en el desarrollo del tracto respiratorio superior neonatal (URT). ) microbioma. Si tiene éxito, este estudio proporcionará un modelo novedoso para inducir y capturar un evento de colonización natural en los recién nacidos. A diferencia de los modelos tradicionales de infección humana controlada, que capturan la colonización inducida por la inoculación, este primer modelo en el hombre estudiaría la transmisión comensal de persona a persona, lo que permitiría comparar los cambios en el microbioma y la microevolución comensal adaptativa en parejas madre-hijo. Ya llevamos a cabo una investigación relevante sobre participación del público y del paciente, en la que las 12 mujeres embarazadas entrevistadas informaron su aprobación para este estudio propuesto, y 11 expresaron que les habría interesado participar en dicho estudio.

Nos acercaremos a gestantes sanas en su segundo y tercer trimestre de gestación. La evaluación de elegibilidad y la inscripción se llevarán a cabo entre las semanas 34+0 y 36+6 de gestación, y 20 mujeres (que aún no hayan sido colonizadas con N. lactamica) serán inoculadas por vía nasal con 10^5 unidades formadoras de colonias de N. lactamica Y92-1009 a partir de los 36 años. 0 a 37+6 semanas de gestación. Las muestras se obtendrán de las nuevas madres (nasofaríngeas, orofaríngeas y saliva) y sus recién nacidos (nasofaríngeas y saliva) al día 1, 1 semana, 1 mes y 4 meses después del parto. Si es posible, y con el consentimiento de la voluntaria, recolectaremos una muestra de sangre del cordón umbilical en el momento del parto y una muestra de sangre venosa infantil al mes y a los 4 meses posteriores al parto, para su almacenamiento y uso en estudios futuros. También recolectaremos una muestra de sangre venosa materna a los 4 meses después del parto, así como un hisopo de saliva de cualquier contacto familiar menor de 5 años. No se inocularán los portadores naturales de N. lactamica identificados en la selección, pero se hará un seguimiento de sus recién nacidos para la toma de muestras biológicas.

Los hisopos faríngeos y de saliva se suspenderán en un medio de almacenamiento, se dividirán en alícuotas y se almacenarán a -80 °C. La colonización de N. lactamica se confirmará utilizando agar selectivo, tinción de Gram, microscopía y pruebas de índice de perfil analítico (y tiempo de vuelo de desorción/ionización láser asistida por matriz para resultados no concluyentes). Se cuantificará la densidad de colonización de N. lactamica, los aislamientos se almacenarán a -80 °C y se confirmará la identidad de la cepa Y92-1009 mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) dirigida.

El análisis del microbioma se realizará en alícuotas descongeladas de muestras emparejadas de madre y recién nacido, mediante extracción de ADN, PCR del gen del ácido ribonucleico ribosómico (ARNr) 16S y secuenciación de amplicón. Se eliminarán las lecturas de secuencias quiméricas y de mala calidad, y las lecturas de alta calidad se recortarán, alinearán y agruparán para la clasificación taxonómica y el análisis estadístico.

Los aislamientos maternos y neonatales emparejados confirmados como N. lactamica Y92-1009 se secuenciarán y los genomas resultantes se asignarán a un genoma completo de referencia cerrado de N. lactamica Y92-1009, para evaluar la evidencia de microevolución distinta.

También compararemos perfiles de microbiomas emparejados para identificar organismos candidatos que están presentes en las madres y sus bebés. Las alícuotas de muestras emparejadas de madre y recién nacido se descongelarán y colocarán en placas en medios selectivos, y los aislamientos de las especies candidatas se identificarán mediante tinción de Gram, microscopía y otras pruebas microbiológicas relevantes. Los aislamientos resultantes se secuenciarán y analizarán en busca de evidencia de cepas compartidas entre las madres y sus recién nacidos, lo que sugiere una transferencia horizontal.