Lactamica 9: Neisseria Lactamica Inokulering under sen graviditet

Vi planerar att utföra nasal inokulering med N. lactamica (vildtypsstam Y92-1009) hos friska gravida kvinnor, för att fastställa om horisontell N. lactamica-överföring till deras nyfödda inträffar och för att karakterisera påverkan på de utvecklande neonatala övre luftvägarna (URT) ) mikrobiom. Om den lyckas kommer denna studie att ge en ny modell för att framkalla och fånga en naturlig kolonisationshändelse hos nyfödda. Till skillnad från traditionella kontrollerade mänskliga infektionsmodeller, som fångar inokulationsinducerad kolonisering, skulle denna först-i-människa-modell studera kommensal överföring från person till person, vilket möjliggör jämförelse av mikrobiomförändringar och adaptiv kommensal mikroevolution i moder-spädbarnspar. Vi har redan genomfört relevant forskning om patienten och allmänhetens delaktighet, där alla 12 intervjuade gravida kvinnor rapporterade godkännande för denna föreslagna studie, och 11 uttryckte att de skulle ha varit intresserade av att delta i en sådan studie.

Vi kommer att närma oss friska gravida kvinnor i deras andra och tredje trimester av graviditeten. Behörighetsscreening och inskrivning kommer att äga rum vid 34+0 till 36+6 veckors graviditet, och 20 kvinnor (inte redan koloniserade med N. lactamica) kommer att inokuleras nasalt med 10^5 kolonibildande enheter N. lactamica Y92-1009 vid 36+ 0 till 37+6 veckors graviditet. Prover kommer att tas från nyblivna mödrar (nasofaryngeal, orofaryngeal och saliv) och deras nyfödda (nasofaryngeal och saliv) 1 dag, 1 vecka, 1 månad och 4 månader efter förlossningen. Om möjligt, och med volontärens samtycke, kommer vi att samla in ett navelsträngsblodprov vid förlossningen och ett venöst blodprov hos spädbarn 1 månad och 4 månader efter förlossningen, för förvaring och användning i framtida studier. Vi kommer också att ta ett venöst blodprov från modern 4 månader efter förlossningen, samt en salivpinne från alla hushållskontakter som är under 5 år. Eventuella naturliga N. lactamica-bärare som identifieras vid screening kommer inte att inokuleras, utan kommer att följas upp med sina nyfödda för biologisk provtagning.

Svalg- och salivprover kommer att suspenderas i lagringsmedium, alikvoteras och förvaras vid -80°C. N. lactamica-kolonisering kommer att bekräftas med hjälp av selektiv agar, gramfärgning, mikroskopi och analytisk profilindextestning (och matrisassisterad laserdesorption/joniseringstid för flygning för osäkra resultat). Koloniseringstätheten för N. lactamica kommer att kvantifieras, isolaten kommer att lagras vid -80°C och Y92-1009-stamidentiteten kommer att bekräftas med hjälp av riktad polymeraskedjereaktion (PCR).

Mikrobiomanalys kommer att utföras på tinade alikvoter av parade moder-nyfödda prover, genom DNA-extraktion, 16S ribosomal ribonukleinsyra (rRNA) gen-PCR och amplikonsekvensering. Dålig kvalitet och chimära sekvensavläsningar kommer att tas bort, och högkvalitativa avläsningar kommer att trimmas, justeras och grupperas för taxonomisk klassificering och statistisk analys.

Parade maternala och neonatala isolat bekräftade som N. lactamica Y92-1009 kommer att sekvenseras, och resulterande genom kommer att kartläggas till ett komplett N. lactamica Y92-1009 stängt referensgenom, för att bedöma bevis på distinkt mikroevolution.

Vi kommer också att jämföra parade mikrobiomprofiler för att identifiera kandidatorganismer som finns hos mödrar och deras spädbarn. Parade provalikvoter från moder- och nyfödda kommer att tinas och ströks ut på selektiva medier, och isolat av kandidatarter kommer att identifieras med hjälp av gramfärgning, mikroskopi och andra relevanta mikrobiologiska tester. Resulterande isolat kommer att sekvenseras och analyseras för bevis på stamdelning mellan mödrar och deras nyfödda, vilket tyder på horisontell överföring.