Lactamica 9: Impfung mit Neisseria Lactamica in der Spätschwangerschaft

Wir planen eine nasale Inokulation mit N. lactamica (Wildtyp-Stamm Y92-1009) bei gesunden schwangeren Frauen durchzuführen, um festzustellen, ob eine horizontale Übertragung von N. lactamica auf ihre Neugeborenen erfolgt, und um die Auswirkungen auf die sich entwickelnden oberen Atemwege des Neugeborenen (URT ) Mikrobiom. Bei Erfolg wird diese Studie ein neuartiges Modell zur Induktion und Erfassung eines natürlichen Kolonisationsereignisses bei Neugeborenen liefern. Im Gegensatz zu traditionellen kontrollierten menschlichen Infektionsmodellen, die die durch Impfung induzierte Besiedlung erfassen, würde dieses First-in-Man-Modell die kommensale Übertragung von Person zu Person untersuchen und einen Vergleich von Mikrobiomveränderungen und adaptiver kommensaler Mikroevolution in Mutter-Kind-Paaren ermöglichen. Wir haben bereits relevante Untersuchungen zur Patienten- und Öffentlichkeitsbeteiligung durchgeführt, bei denen alle 12 befragten schwangeren Frauen ihre Zustimmung zu dieser vorgeschlagenen Studie angaben und 11 zum Ausdruck brachten, dass sie an einer Teilnahme an einer solchen Studie interessiert gewesen wären.

Wir wenden uns an gesunde Schwangere im zweiten und dritten Schwangerschaftstrimester. Das Eignungsscreening und die Aufnahme finden in der Schwangerschaftswoche 34+0 bis 36+6 statt, und 20 Frauen (die noch nicht mit N. lactamica kolonisiert sind) werden nasal mit 10^5 koloniebildenden Einheiten N. lactamica Y92-1009 im Alter von 36+ geimpft 0 bis 37 + 6 Wochen Schwangerschaft. Proben werden von neuen Müttern (nasopharyngeal, oropharyngeal und Speichel) und ihren Neugeborenen (nasopharyngeal und Speichel) 1 Tag, 1 Woche, 1 Monat und 4 Monate nach der Geburt entnommen. Wenn möglich und mit Zustimmung des Freiwilligen, werden wir bei der Entbindung eine Nabelschnurblutprobe und 1 Monat und 4 Monate nach der Geburt eine venöse Blutprobe des Säuglings zur Aufbewahrung und Verwendung in zukünftigen Studien entnehmen. Wir werden auch 4 Monate nach der Geburt eine mütterliche venöse Blutprobe sowie einen Speichelabstrich von allen Haushaltskontakten unter 5 Jahren entnehmen. Alle natürlichen N. lactamica-Träger, die beim Screening identifiziert werden, werden nicht geimpft, aber ihre Neugeborenen werden zur biologischen Probenahme weiterverfolgt.

Rachen- und Speichelabstriche werden in Aufbewahrungsmedium suspendiert, aliquotiert und bei -80°C gelagert. Die Besiedelung mit N. lactamica wird mit selektivem Agar, Gram-Färbung, Mikroskopie und analytischen Profilindextests (und Matrix-unterstützter Laserdesorption/Ionisations-Flugzeit für nicht schlüssige Ergebnisse) bestätigt. Die Besiedelungsdichte von N. lactamica wird quantifiziert, die Isolate werden bei -80 °C gelagert und die Identität des Y92-1009-Stammes wird mittels gezielter Polymerase-Kettenreaktion (PCR) bestätigt.

Die Mikrobiomanalyse wird an aufgetauten Aliquots gepaarter Mutter-Neugeborenen-Proben durch DNA-Extraktion, 16S-Ribonukleinsäure (rRNA)-Gen-PCR und Amplikon-Sequenzierung durchgeführt. Reads mit schlechter Qualität und chimären Sequenzen werden entfernt, und Reads mit hoher Qualität werden für die taxonomische Klassifizierung und statistische Analyse getrimmt, ausgerichtet und geclustert.

Gepaarte mütterliche und neugeborene Isolate, die als N. lactamica Y92-1009 bestätigt wurden, werden sequenziert, und die resultierenden Genome werden auf ein vollständiges geschlossenes N. lactamica Y92-1009-Referenzgenom abgebildet, um den Nachweis einer ausgeprägten Mikroevolution zu untersuchen.

Wir werden auch gepaarte Mikrobiomprofile vergleichen, um Kandidatenorganismen zu identifizieren, die bei Müttern und ihren Säuglingen vorhanden sind. Gepaarte Mutter-Neugeborenen-Probenaliquots werden aufgetaut und auf selektive Medien ausplattiert, und Isolate von Kandidatenarten werden mit Gram-Färbung, Mikroskopie und anderen relevanten mikrobiologischen Tests identifiziert. Die resultierenden Isolate werden sequenziert und auf Hinweise auf eine gemeinsame Belastung zwischen Müttern und ihren Neugeborenen analysiert, was auf eine horizontale Übertragung hindeutet.