ラクタミカ9：妊娠後期におけるナイセリア・ラクタミカの接種

健康な妊婦にN.ラクタミカ（野生型株Y92-1009）を鼻から接種し、新生児へのN.ラクタミカの水平移行が起こるかどうかを確認し、発達中の新生児上気道（URT）への影響を特徴付ける予定です。 )マイクロバイオーム。 成功した場合、この研究は、新生児の自然定着イベントを誘導および捕捉するための新しいモデルを提供します。 接種によるコロニー形成を捉える従来の制御されたヒト感染モデルとは異なり、このファーストインマンモデルは、人から人への共生伝達を研究し、母子ペアにおけるマイクロバイオームの変化と適応共生微進化の比較を可能にします。 私たちはすでに関連する患者と市民の参加に関する調査を実施しており、インタビューを受けた 12 人の妊婦全員がこの提案された調査の承認を報告し、11 人がそのような調査に参加することに興味があると表明しました。

妊娠後期・後期の健康な妊婦さんにアプローチします。 適格性スクリーニングと登録は、妊娠 34+0 から 36+6 週で行われ、20 人の女性 (まだ N. ラクタミカが定着していない) に 10^5 コロニー形成単位 N. ラクタミカ Y92-1009 が 36+ で鼻から接種されます。妊娠0～37+6週。 サンプルは、分娩後 1 日、1 週間、1 か月、および 4 か月で、新しい母親 (鼻咽頭、中咽頭、および唾液) とその新生児 (鼻咽頭および唾液) から取得されます。 可能であれば、ボランティアの同意を得て、出産時に臍帯血サンプルを採取し、産後 1 か月と 4 か月に幼児の静脈血サンプルを収集し、保存して将来の研究に使用します。 また、産後4か月で母体の静脈血サンプルと、5歳未満の家庭内接触者から唾液綿棒を採取します. スクリーニングで特定されたN.ラクタミカの自然保菌者は接種されませんが、生物学的サンプリングのために新生児でフォローアップされます。

咽頭および唾液スワブを保存培地に懸濁し、分注して-80°Cで保存します。 N. ラクタミカのコロニー形成は、選択寒天、グラム染色、顕微鏡検査、および分析プロファイル インデックス テスト (決定的でない結果については、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間) を使用して確認されます。 N.ラクタミカのコロニー形成密度を定量化し、分離株を-80°Cで保存し、標的ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用してY92-1009株の同一性を確認します。

マイクロバイオーム分析は、DNA抽出、16Sリボソームリボ核酸（rRNA）遺伝子PCR、およびアンプリコン配列決定により、対になった母親と新生児のサンプルの解凍アリコートで実行されます。 低品質およびキメラ配列の読み取りは削除され、高品質の読み取りは、分類学的分類および統計分析のためにトリミング、整列、およびクラスター化されます。

N. ラクタミカ Y92-1009 として確認されたペアの母体および新生児分離株の配列が決定され、得られたゲノムが完全な N. ラクタミカ Y92-1009 クローズド リファレンス ゲノムにマッピングされ、明確な小進化の証拠を評価します。

また、対になったマイクロバイオーム プロファイルを比較して、母親とその乳児に存在する候補生物を特定します。 ペアになった母親と新生児のサンプルのアリコートを解凍し、選択培地に播種し、グラム染色、顕微鏡検査、およびその他の関連する微生物学的検査を使用して、候補種の分離株を特定します。 得られた分離株は配列決定され、母親とその新生児の間で菌株が共有されている証拠について分析され、水平伝達が示唆されます。