Lactamica 9: Neisseria Lactamica-inenting tijdens de late zwangerschap

We zijn van plan om nasale inoculatie uit te voeren met N. lactamica (wildtype stam Y92-1009) bij gezonde zwangere vrouwen, om vast te stellen of horizontale overdracht van N. lactamica naar hun pasgeborenen plaatsvindt, en om de impact op de zich ontwikkelende neonatale bovenste luchtwegen (URT) te karakteriseren. ) microbioom. Indien succesvol, zal deze studie een nieuw model bieden voor het induceren en vastleggen van een natuurlijke kolonisatiegebeurtenis bij pasgeborenen. In tegenstelling tot traditionele gecontroleerde menselijke infectiemodellen, die door inoculatie geïnduceerde kolonisatie vastleggen, zou dit first-in-man-model de commensale overdracht van persoon tot persoon bestuderen, waardoor microbioomveranderingen en adaptieve commensale micro-evolutie in paren van moeder en kind kunnen worden vergeleken. We hebben al relevant onderzoek naar patiënt- en publieksbetrokkenheid uitgevoerd, waarin alle 12 geïnterviewde zwangere vrouwen hun goedkeuring gaven aan dit voorgestelde onderzoek en 11 aangaven geïnteresseerd te zijn in deelname aan een dergelijk onderzoek.

We benaderen gezonde zwangere vrouwen in het tweede en derde trimester van de zwangerschap. Geschiktheidsscreening en inschrijving vinden plaats bij een zwangerschapsduur van 34+0 tot 36+6 weken, en 20 vrouwen (die nog niet gekoloniseerd zijn met N. lactamica) zullen nasaal worden geïnoculeerd met 10^5 kolonievormende eenheden N. lactamica Y92-1009 op 36+ 0 tot 37+6 weken zwangerschap. Monsters zullen worden verkregen van nieuwe moeders (nasofaryngeaal, orofaryngeaal en speeksel) en hun pasgeborenen (nasofaryngeaal en speeksel) op 1 dag, 1 week, 1 maand en 4 maanden na de bevalling. Indien mogelijk, en met toestemming van de vrijwilliger, nemen we een navelstrengbloedmonster af bij de bevalling en een veneus bloedmonster bij de baby na 1 maand en 4 maanden na de bevalling, voor opslag en gebruik in toekomstige studies. We nemen ook een maternale veneus bloedmonster af 4 maanden na de bevalling, evenals een speekseluitstrijkje van alle huishoudelijke contacten jonger dan 5 jaar. Alle natuurlijke N. lactamica-dragers die bij de screening worden geïdentificeerd, worden niet geïnoculeerd, maar zullen worden gevolgd met hun pasgeborenen voor biologische bemonstering.

Farynx- en speekseluitstrijkjes worden gesuspendeerd in opslagmedium, in porties verdeeld en bewaard bij -80°C. De kolonisatie van N. lactamica zal worden bevestigd met behulp van selectieve agar-agar-, gramkleuring-, microscopie- en analytische profielindextesten (en matrixondersteunde laserdesorptie/-ionisatie time-of-flight voor onduidelijke resultaten). De kolonisatiedichtheid van N. lactamica zal worden gekwantificeerd, de isolaten zullen worden bewaard bij -80°C en de identiteit van de Y92-1009-stam zal worden bevestigd met behulp van gerichte polymerasekettingreactie (PCR).

Microbioomanalyse zal worden uitgevoerd op ontdooide aliquots van gepaarde moeder-pasgeboren monsters, door middel van DNA-extractie, 16S ribosomaal ribonucleïnezuur (rRNA) gen-PCR en amplicon-sequencing. Uitlezingen van slechte kwaliteit en chimere sequenties worden verwijderd, en uitlezingen van hoge kwaliteit worden bijgesneden, uitgelijnd en geclusterd voor taxonomische classificatie en statistische analyse.

Gepaarde maternale en neonatale isolaten bevestigd als N. lactamica Y92-1009 zullen worden gesequenced, en de resulterende genomen zullen worden toegewezen aan een compleet N. lactamica Y92-1009 gesloten referentiegenoom, om te beoordelen op bewijs van duidelijke micro-evolutie.

We zullen ook gepaarde microbioomprofielen vergelijken om kandidaat-organismen te identificeren die aanwezig zijn bij moeders en hun baby's. Gepaarde monstermonsters van moeder en pasgeborene zullen worden ontdooid en uitgeplaat op selectieve media, en isolaten van kandidaat-soorten zullen worden geïdentificeerd met behulp van Gram-kleuring, microscopie en andere relevante microbiologische tests. De resulterende isolaten zullen worden gesequenced en geanalyseerd op bewijs van spanningsdeling tussen moeders en hun pasgeborenen, wat een horizontale overdracht suggereert.