Uuden ulosteeseen perustuvan qPCR:n arviointi lasten ja HIV-tartunnan saaneiden ihmisten tuberkuloosin diagnosoimiseksi (Stool4TB)

Tuberkuloosi (TB) on edelleen johtava sairastuvuuden ja kuolleisuuden aiheuttaja lasten ja HIV-tartuntojen (PLHIV) keskuudessa. Huolimatta merkittävästä edistymisestä tuberkuloosin diagnostiikassa, lasten tuberkuloosidiagnoosin parantaminen on edelleen suuri haaste, ja se on WHO:n "Tuberkuloosin lopettamisen strategian" avainpilari. Tuberkuloosin laboratoriovarmistus on erityisen haastavaa lapsilla ja PLHIV-tartunnalla, koska yskösnäytteiden saaminen on vaikeaa ja taudin vaikeusbasillaarinen luonne. Tästä johtuen pienten lasten keuhkotuberkuloosin ja immunosuppressoidun PLHIV-tartunnan bakteriologinen vahvistus on edelleen valitettavan alhainen. Kyvyttömyys vahvistaa tuberkuloosia bakteriologisesti johtaa sekä i) alidiagnoosiin, mikä johtaa huonompiin tuloksiin, mukaan lukien lisääntynyt kuolleisuus, että ii) yli- tai alidiagnoosiin ja huonoon resurssien allokointiin. Ottaen huomioon tällä hetkellä saatavilla olevien ysköspohjaisten diagnostisten testien rajoitukset näissä herkissä väestöryhmissä, on tarpeen kehittää uusia työkaluja ja tunnistaa helposti otettavia ei-hengitysnäytteitä, jotka yhdessä voisivat parantaa bakteriologista vahvistusta. Alustavien tietojen mukaan uusi alusta, innovatiivinen ulosteiden homogenisointi- ja DNA-eristysmenetelmä, tuo lisäarvoa olemassa olevaan ysköspohjaiseen diagnostiikkaan lisäämällä bakteriologisen varmistuksen määrää ja voisi olla hyödyllinen myös hoitovasteen seurantavälineenä. Tämä alusta on mahdollista mukauttaa hoitopisteen (POC) diagnostiikkaan ja siten helposti ottaa käyttöön resurssirajoitteisissa perusterveydenhuollon keskuksissa.

Tavoite: Tämän projektin tavoitteena on arvioida ulostehelmiin perustuvan reaaliaikaisen kvantitatiivisen PCR-alustan (qPCR) diagnostista suorituskykyä lasten tuberkuloosin ja PLHIV:n diagnosoinnissa. Tätä arvioidaan Mosambikin, Eswatinin ja Ugandan korkean tuberkuloosi- ja HIV-taakan olosuhteissa sillä oletuksella, että se kaventaa suurta tuberkuloositapausten havaitsemisvajetta parantamalla tuberkuloosin varmistusasteita lapsilla ja PLHIV-tartunnalla, samalla kun se osoittautuu toteuttamiskelpoiseksi ja hyväksyttäväksi.

Ensisijainen tavoite:

• Arvioi ulostepohjaisen reaaliaikaisen kvantitatiivisen PCR:n diagnostinen tarkkuus Mycobacterium tuberculosis -bakteerin DNA:n havaitsemiseksi (MTB qPCR) verrattuna yhdistettyyn vertailustandardiin (yskös- ja uloste Xpert Ultra, yskösviljelmä ja virtsa TB-LAM).

Toissijaiset tavoitteet:

• Arvioi ulostepohjaisen Mtb qPCR:n diagnostinen tarkkuus yksittäisten yskösten ja ulosteiden Xpert Ultra-, virtsan LAM-, yskösnäytteen ja yskösviljelyn (MGIT) tuloksiin käyttämällä konsensuskliinisen tapauksen määritelmää vertailustandardina.
• Arvioi kvantitatiivisen ulosteeseen perustuvan MTB qPCR -alustan hyödyllisyyttä työkaluna seurata lasten ja PLHIV:n hoitovastetta.
• Luoda hyvin karakterisoitujen lasten näytteiden biovarasto jokaiseen tutkimuspaikkaan tukemaan uudenlaisen biomarkkeritutkimuksen tulevaa kehitystä ja arviointia.

Metodologia: Tämä on prospektiivinen diagnostinen arviointitutkimus, jossa on sisäkkäinen pitkittäinen kohorttiarviointi. 30 kuukauden rekrytointijakson aikana tuberkuloosia sairastavat henkilöt ilmoittautuvat peräkkäin kahteen tutkimusryhmään: alle 8-vuotiaat lapset HIV-statuksesta riippumatta (N=1295) ja HIV-tartunnan saaneet aikuiset immunologisesta tilasta riippumatta ( N = 650). Kuusikymmentä ylimääräistä henkilöä osallistuu terveinä (oireettomana) kontrollina. Kliinisen, radiologisen ja bakteriologisen arvioinnin jälkeen tuberkuloositapaukset hoidetaan kansallisten ohjeiden mukaisesti. Osallistujia, joilla on diagnosoitu tuberkuloosi, seurataan 6 kuukauden ajan hoidon aloittamisesta hoidon vasteen ja tulosten arvioimiseksi. Kliinisen tapauksen määritelmä luodaan viitestandardiksi ja määritellään kuka tahansa osallistuja, jonka kanssa tehdään päätös aloittaa ATT (TB-tapaukset luokitellaan vahvistetuiksi tai vahvistamattomiksi). Erityisesti lapset luokitellaan kolmeen erilliseen lasten päätepisteluokkaan (vahvistettu tuberkuloosi, vahvistamaton tuberkuloosi ja epätodennäköinen tuberkuloosi) bakteriologisten, radiologisten ja kliinisten kriteerien perusteella kansainvälisten konsensusohjeiden mukaisesti.