Valutazione di una nuova qPCR basata sulle feci per la diagnosi di tubercolosi nei bambini e nelle persone affette da HIV (Stool4TB)

La tubercolosi (TBC) continua ad essere una delle principali cause di morbilità e mortalità tra i bambini e le persone che vivono con l'HIV (PLHIV). Nonostante i significativi progressi nella diagnostica della tubercolosi, il miglioramento della diagnosi della tubercolosi infantile continua a rappresentare una sfida importante ed è un pilastro fondamentale della "Strategia per porre fine alla tubercolosi" dell'OMS. La conferma di laboratorio della tubercolosi è particolarmente impegnativa nei bambini e nei PLHIV data la difficoltà nell'ottenere campioni di espettorato e la natura pauci-bacillare della malattia. Di conseguenza, la conferma batteriologica della tubercolosi polmonare nei bambini piccoli e nel PLHIV immunosoppresso rimane deludentemente bassa. L'incapacità di confermare batteriologicamente la tubercolosi, si traduce sia in i) sotto diagnosi che porta a esiti peggiori tra cui un aumento della mortalità e ii) sovra o sotto diagnosi e scarsa allocazione delle risorse. Dati i limiti dei test diagnostici basati sull'espettorato attualmente disponibili in queste popolazioni vulnerabili, è necessario sviluppare nuovi strumenti e identificare campioni non respiratori facili da raccogliere che, combinati, potrebbero migliorare la conferma batteriologica. I dati preliminari suggeriscono che una nuova piattaforma, un innovativo metodo di omogeneizzazione delle feci e isolamento del DNA, aggiunge valore alla diagnostica esistente basata sull'espettorato aumentando i tassi di conferma batteriologica e potrebbe anche essere utile come strumento di monitoraggio per la risposta al trattamento. Questa piattaforma ha il potenziale per essere adattata a una diagnostica point of care (POC) e quindi facilmente implementata in centri di assistenza sanitaria di base con risorse limitate.

Obiettivo: Lo scopo di questo progetto è valutare le prestazioni diagnostiche della piattaforma PCR quantitativa in tempo reale (qPCR) basata su perline fecali per la diagnosi della tubercolosi nei bambini e PLHIV. Ciò sarà valutato nelle impostazioni ad alto carico di tubercolosi e HIV di Mozambico, Eswatini e Uganda, nell'ipotesi che ridurrà l'ampio divario di rilevamento dei casi di tubercolosi migliorando i tassi di conferma della tubercolosi nei bambini e PLHIV, dimostrandosi fattibile e accettabile.

Obiettivo primario:

• Valutare l'accuratezza diagnostica di una PCR quantitativa in tempo reale basata sulle feci per la rilevazione del DNA di Mycobacterium tuberculosis (MTB qPCR), rispetto a uno standard di riferimento composito (Xpert Ultra dell'espettorato e delle feci, coltura dell'espettorato e TB-LAM delle urine).

Obiettivi secondari:

• Valutare l'accuratezza diagnostica della Mtb qPCR basata sulle feci rispetto ai risultati individuali di espettorato e feci Xpert Ultra, LAM delle urine, striscio di espettorato e coltura dell'espettorato (MGIT) utilizzando una definizione di caso clinico di consenso come standard di riferimento.
• Valutare l'utilità della piattaforma qPCR MTB quantitativa basata sulle feci come strumento per monitorare la risposta al trattamento per bambini e PLHIV.
• Creare un biorepository di campioni pediatrici ben caratterizzati in ciascuno dei siti di studio per supportare lo sviluppo e la valutazione futuri della ricerca sui nuovi biomarcatori.

Metodologia: si tratta di uno studio di valutazione diagnostica prospettica con una valutazione di coorte longitudinale nidificata. Durante un periodo di reclutamento di 30 mesi, le persone con presunta tubercolosi si iscriveranno consecutivamente a far parte di due gruppi di studio: bambini di età inferiore a 8 anni, indipendentemente dallo stato HIV (N=1295) e adulti che vivono con l'HIV, indipendentemente dallo stato immunologico ( N=650). Sessanta persone in più prenderanno parte come controlli sani (asintomatici). Dopo la valutazione clinica, radiologica e batteriologica, i casi di tubercolosi saranno trattati secondo le linee guida nazionali. I partecipanti con diagnosi di tubercolosi saranno seguiti per 6 mesi dall'inizio del trattamento al fine di valutare la risposta al trattamento e gli esiti. Una definizione di caso clinico sarà stabilita come standard di riferimento e definita come qualsiasi partecipante in cui viene presa la decisione di iniziare l'ATT (i casi di tubercolosi saranno classificati come confermati o non confermati). Nello specifico, i bambini saranno classificati in 3 distinte categorie di endpoint pediatrici (TBC confermata, TB non confermata e TB improbabile) sulla base di criteri batteriologici, radiologici e clinici, seguendo le linee guida di consenso internazionale.