Evaluación de una nueva qPCR basada en heces para el diagnóstico de tuberculosis en niños y personas que viven con el VIH (Stool4TB)

La tuberculosis (TB) sigue siendo una de las principales causas de morbilidad y mortalidad entre los niños y las personas que viven con el VIH (PVVIH). A pesar del progreso significativo en el diagnóstico de TB, la mejora del diagnóstico de TB infantil sigue siendo un desafío importante y es un pilar clave de la "Estrategia para poner fin a la TB" de la OMS. La confirmación de laboratorio de TB es particularmente desafiante en niños y PVVIH dada la dificultad para obtener muestras de esputo y la naturaleza paucibacilar de la enfermedad. En consecuencia, la confirmación bacteriológica de TB pulmonar en niños pequeños y PVVIH inmunodeprimidos sigue siendo decepcionantemente baja. La incapacidad para confirmar bacteriológicamente la TB da como resultado i) un diagnóstico insuficiente, lo que conduce a peores resultados, incluido un aumento de la mortalidad, y ii) un diagnóstico excesivo o insuficiente, y una asignación de recursos deficiente. Dadas las limitaciones de las pruebas diagnósticas basadas en esputo actualmente disponibles en estas poblaciones vulnerables, existe la necesidad de desarrollar nuevas herramientas e identificar muestras no respiratorias fáciles de recolectar que, combinadas, podrían mejorar la confirmación bacteriológica. Los datos preliminares sugieren que una nueva plataforma, un método innovador de homogeneización de heces y aislamiento de ADN, agrega valor a los diagnósticos basados ​​en esputo existentes al aumentar las tasas de confirmación bacteriológica, y también podría ser útil como herramienta de monitoreo para la respuesta al tratamiento. Esta plataforma tiene el potencial de adaptarse a un diagnóstico de punto de atención (POC) y, por lo tanto, implementarse fácilmente en centros de atención médica básica con recursos limitados.

Objetivo: El objetivo de este proyecto es evaluar el rendimiento diagnóstico de la plataforma de PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) basada en microesferas de heces para el diagnóstico de TB en niños y PVVIH. Esto se evaluará en los entornos de alta carga de TB y VIH de Mozambique, Eswatini y Uganda, bajo la hipótesis de que reducirá la gran brecha de detección de casos de TB al mejorar las tasas de confirmación de TB en niños y PVVIH, al tiempo que resulta factible y aceptable.

Objetivo primario:

• Evaluar la precisión diagnóstica de una PCR cuantitativa en tiempo real basada en heces para detectar ADN de Mycobacterium tuberculosis (MTB qPCR), en comparación con un estándar de referencia compuesto (Xpert Ultra de esputo y heces, cultivo de esputo y TB-LAM en orina).

Objetivos secundarios:

• Evalúe la precisión diagnóstica de la qPCR Mtb basada en heces para resultados individuales de esputo y heces Xpert Ultra, LAM en orina, frotis de esputo y cultivo de esputo (MGIT) utilizando una definición de caso clínico consensuada como estándar de referencia.
• Evaluar la utilidad de la plataforma cuantitativa MTB qPCR basada en heces como herramienta para monitorear la respuesta al tratamiento para niños y PVVIH.
• Crear un biodepósito de muestras pediátricas bien caracterizadas en cada uno de los sitios de estudio para respaldar el desarrollo y la evaluación futuros de nuevas investigaciones de biomarcadores.

Metodología: Se trata de un estudio prospectivo de evaluación diagnóstica con evaluación de cohorte longitudinal anidada. Durante un período de reclutamiento de 30 meses, las personas con presunción de TB se inscribirán consecutivamente formando parte de dos grupos de estudio: Niños menores de 8 años, independientemente del estado serológico respecto del VIH (N=1295) y adultos que viven con el VIH, independientemente del estado inmunológico ( N=650). Sesenta personas adicionales participarán como controles sanos (asintomáticos). Después de la evaluación clínica, radiológica y bacteriológica, los casos de TB serán tratados de acuerdo con las pautas nacionales. Los participantes diagnosticados con TB serán seguidos durante 6 meses desde el inicio del tratamiento para evaluar la respuesta al tratamiento y los resultados. Se establecerá una definición de caso clínico como estándar de referencia y se definirá como todo participante en el que se decida iniciar TAD (los casos de TB se clasificarán como confirmados o no confirmados). Específicamente, los niños se clasificarán en 3 categorías distintas de criterios de valoración pediátricos (TB confirmada, TB no confirmada y TB improbable) según criterios bacteriológicos, radiológicos y clínicos, siguiendo las pautas de consenso internacional.