Tutkimus luovuttajaperäisen soluttoman DNA:n havaitsemiseksi munuaissiirron jälkeen käyttäen Devysers NGS-pohjaista kimerismimääritystä.

Joka vuosi 40-60 potilaalle tehdään munuaisensiirto elävän luovuttajan (LD) kanssa Karolinska University Hospitalissa. Ennen elinsiirtoa näiden potilaiden ja heidän luovuttajiensa immunologinen yhteensopivuus tutkitaan. Tämä sisältää sytotoksiset ja virtaussytometriset ristisovitukset, HLA-tyypityksen sekä paneelireaktiivisten HLA-vasta-aineiden (PRA) mahdollisen läsnäolon määrittämisen. Yleensä nämä tutkimukset tehdään 2-3 kuukautta ennen munuaisensiirtoa. Kun potilas on hyväksytty elinsiirtoon tietyn elävän luovuttajan kanssa, häneltä kysytään ennen siirtoa, onko hän kiinnostunut osallistumaan tähän tutkimukseen. Jos potilas ja luovuttaja hyväksyvät, keräämme ennen siirtoa 15 ml verta sopivilla näytteenkeräysputkilla (Cell-Free BCT putket). Tätä näytettä käytetään potilaan ja luovuttajan seulomiseen tiettyjen geneettisten markkerien varalta. Lisäksi ennen siirtoa otettuja näytteitä käytetään HLA-vasta-aineiden läsnäolon tai puuttumisen määrittämiseen kullekin potilaalle. Pyrimme ottamaan mukaan jopa 50 potilasta nykyiseen tutkimukseen.

Ensimmäisten 24–48 tunnin aikana siirron jälkeen potilaalta otetaan vielä kaksi näytettä (10 ml) dd-cfDNA:n mahdollisen läsnäolon mittaamiseksi, mukaan lukien soluttomat partikkelit, kuten eksosomit. Soluton DNA ja RNA kaikista näytteistä uutetaan, säilytetään pakastettuna ja myöhemmin sekvensoidaan. Elinsiirron ja immunosuppressiivisen hoidon aloittamisen jälkeen näytteet otetaan analysoitavaksi kerran viikossa 3 kuukauden ajan. Kaikki kerätyt näytteet joko analysoidaan välittömästi tai pakastetaan myöhempää analysointia varten. Säilytetyt pakastetut näytteet voidaan myöhemmin sulattaa, jakaa ja analysoida käyttämällä molekyylitekniikoita, mukaan lukien sekvensointi dd-cfDNA:n mittaamiseksi tai HLA-vasta-aineiden läsnäolon analysointi käyttämällä kaupallisia helmitekniikoita (Luminex tai Immucor). Näiden määritysten tulokset lisätään erityiseen tietokantaan. Saatuja laboratoriotuloksia verrataan kliinisiin tuloksiin, mukaan lukien siirteen eloonjääminen, potilaan eloonjääminen, kliiniset ja subkliiniset hylkimisreaktiot jne. sekä muut laboratoriotiedot (esim. Tulokset siirteen patologisesta tutkimuksesta, kliinisestä kemiasta, immunosuppressiivisten lääkkeiden pitoisuudesta jne.).