Studie zum Nachweis von Spender-abgeleiteter zellfreier DNA nach Nierentransplantation unter Verwendung des NGS-basierten Chimärismus-Assays von Devysers.

Jedes Jahr unterziehen sich 40-60 Patienten einer Nierentransplantation mit einem Lebendspender (LD) im Karolinska-Universitätskrankenhaus. Vor der Transplantation werden diese Patienten und ihre Spender auf ihre immunologische Verträglichkeit untersucht. Dazu gehören zytotoxische und durchflusszytometrische Crossmatches, HLA-Typisierung sowie die Bestimmung des möglichen Vorhandenseins von Panel-reaktiven HLA-Antikörpern (PRA). Normalerweise werden diese Untersuchungen 2-3 Monate vor der Nierentransplantation durchgeführt. Sobald ein Patient für eine Transplantation mit einem bestimmten Lebendspender akzeptiert wurde, wird er vor der Transplantation gefragt, ob er an einer Teilnahme an der vorliegenden Studie interessiert ist. Wenn der Patient und der Spender zustimmen, werden wir vor der Transplantation 15 ml Blut mit geeigneten Probenentnahmeröhrchen (Cell-Free BCT-Röhrchen) entnehmen. Diese Probe wird zum Screening von Patient und Spender auf spezifische genetische Marker verwendet. Darüber hinaus werden die Proben vor der Transplantation zur Bestimmung des Vorhandenseins oder Fehlens von HLA-Antikörpern für jeden Patienten verwendet. Wir streben an, bis zu 50 Patienten in die aktuelle Studie einzuschließen.

Während der ersten 24–48 Stunden nach der Transplantation werden dem Patienten zwei weitere Proben (10 ml) entnommen, um das potenzielle Vorhandensein von dd-cfDNA, einschließlich zellfreier Partikel wie Exosomen, zu messen. Die zellfreie DNA und RNA aus allen Proben wird extrahiert, eingefroren gelagert und später sequenziert. Nach der Transplantation und Beginn der immunsuppressiven Therapie werden bis zu 3 Monate lang einmal wöchentlich Proben zur Analyse entnommen. Alle gesammelten Proben werden entweder sofort analysiert oder für zukünftige Analysen eingefroren. Gelagerte gefrorene Proben könnten zu einem späteren Zeitpunkt aufgetaut, gebündelt und unter Verwendung molekularer Techniken analysiert werden, einschließlich Sequenzierung zur Messung von dd-cfDNA oder Analyse des Vorhandenseins von HLA-Antikörpern unter Verwendung kommerzieller Bead-Technologien (Luminex oder Immucor). Die Ergebnisse dieser Untersuchungen werden einer speziellen Datenbank hinzugefügt. Die erhaltenen Laborergebnisse werden mit dem klinischen Ergebnis verglichen, einschließlich Transplantatüberleben, Patientenüberleben, klinischer und subklinischer Abstoßung usw. sowie anderen Labordaten (z. B. Ergebnisse der pathologischen Untersuchung des Transplantats, der klinischen Chemie, der Konzentration von Immunsuppressiva usw.).