Studie detekce bezbuněčné DNA pocházející z dárce po transplantaci ledvin pomocí testu chimerismu založeného na NGS Devysers.

Ve Fakultní nemocnici Karolinska podstoupí ročně 40-60 pacientů transplantaci ledviny od žijícího dárce (LD). Před transplantací jsou tito pacienti a jejich dárci vyšetřeni na jejich imunologickou kompatibilitu. To zahrnuje cytotoxické a průtokové cytometrické křížové zkoušky, HLA typizaci a také stanovení možné přítomnosti panelově reaktivních HLA protilátek (PRA). Obvykle se tato vyšetření provádějí 2-3 měsíce před transplantací ledviny. Jakmile bude pacient přijat k transplantaci u daného žijícího dárce, bude před transplantací dotázán, zda má zájem zúčastnit se této studie. Pokud pacient a dárce přijmou, odebereme před transplantací 15 ml krve pomocí vhodných zkumavek pro odběr vzorků (Cell-Free BCT zkumavky). Tento vzorek bude použit pro screening pacienta a dárce na specifické genetické markery. Dále budou vzorky před transplantací použity pro stanovení přítomnosti nebo nepřítomnosti HLA protilátek u každého pacienta. Naším cílem je zahrnout do současné studie až 50 pacientů.

Během prvních 24-48 hodin po transplantaci budou od pacienta odebrány další dva vzorky (10 ml) pro měření potenciální přítomnosti dd-cfDNA včetně bezbuněčných částic, jako jsou exozomy. Bezbuněčná DNA a RNA ze všech vzorků budou extrahovány, skladovány zmrazené a později sekvenovány. Po transplantaci a zahájení imunosupresivní léčby budou vzorky pro analýzu odebírány jednou týdně po dobu až 3 měsíců. Všechny odebrané vzorky budou buď okamžitě analyzovány, nebo zmrazeny pro budoucí analýzu. Uskladněné zmrazené vzorky mohly být později rozmraženy, dávkovány a analyzovány pomocí molekulárních technik včetně sekvenování pro měření dd-cfDNA nebo analýzy přítomnosti HLA-protilátek pomocí komerčních perličkových technologií (Luminex nebo Immucor). Výsledky z těchto testů budou přidány do vyhrazené databáze. Získané laboratorní výsledky budou porovnány s klinickým výsledkem včetně přežití štěpu, přežití pacientů, klinických a subklinických rejekcí atd., jakož i dalších laboratorních údajů (např. výsledky z patologického vyšetření štěpu, klinické chemie, koncentrace imunosupresiv atd.).