Undersøgelse til påvisning af donorafledt cellefrit DNA efter nyretransplantation ved hjælp af Devysers NGS-baseret kimærismeassay.

Hvert år gennemgår 40-60 patienter en nyretransplantation med en levende donor (LD) på Karolinska Universitetshospitalet. Forud for transplantation undersøges disse patienter og deres donorer for deres immunologiske kompatibilitet. Dette omfatter cytotoksiske- og flowcytometriske krydsparringer, HLA-typebestemmelse samt bestemmelse af mulig tilstedeværelse af panelreaktive HLA-antistoffer (PRA). Normalt udføres disse undersøgelser 2-3 måneder før nyretransplantation. Når en patient er blevet accepteret til transplantation med en given levende donor, vil de forud for transplantationen blive spurgt, om de er interesserede i at deltage i nærværende undersøgelse. Hvis patienten og donoren accepterer det, opsamler vi 15 ml blod før transplantation ved hjælp af passende prøvetagningsrør (cellefrie BCT-rør). Denne prøve vil blive brugt til screening af patient og donor for specifikke genetiske markører. Ydermere vil prætransplantationsprøverne blive brugt til at bestemme tilstedeværelsen eller fraværet af HLA-antistoffer for hver patient. Vi sigter mod at inkludere op til 50 patienter i det aktuelle studie.

I løbet af de første 24-48 timer efter transplantationen vil yderligere to prøver (10 ml) fra patienten blive indsamlet for at måle den potentielle tilstedeværelse af dd-cfDNA inklusive cellefri partikler såsom exosomer. Det cellefrie DNA og RNA fra alle prøver vil blive ekstraheret, opbevaret frosset og senere sekventeret. Efter transplantation og påbegyndelse af den immunsuppressive behandling vil der blive udtaget prøver til analyse en gang om ugen i op til 3 måneder. Alle indsamlede prøver vil enten blive analyseret med det samme eller frosset til fremtidig analyse. Oplagrede frosne prøver kan på et senere tidspunkt optøs, batches og analyseres ved hjælp af molekylære teknikker, herunder sekventering til måling af dd-cfDNA eller analyse af tilstedeværelsen af ​​HLA-antistoffer ved hjælp af kommercielle perleteknologier (Luminex eller Immucor). Resultater fra disse analyser vil blive tilføjet til en dedikeret database. De opnåede laboratorieresultater vil blive sammenlignet med kliniske resultater, herunder graftoverlevelse, patientoverlevelse, kliniske og subkliniske afvisninger osv. samt andre laboratoriedata (f.eks. resultater fra patologisk undersøgelse af transplantatet, klinisk kemi, koncentration af immunsuppressive lægemidler osv.).