Estudo para detecção de DNA livre de células derivadas de doadores após transplante renal usando ensaio de quimerismo baseado em Devysers NGS.

A cada ano, 40 a 60 pacientes são submetidos a transplante renal com doador vivo (LD) no Karolinska University Hospital. Antes do transplante, esses pacientes e seus doadores são investigados quanto à compatibilidade imunológica. Isso inclui provas cruzadas citotóxicas e de citometria de fluxo, tipagem HLA, bem como a determinação da possível presença de anticorpos HLA reativos ao painel (PRA). Normalmente, essas investigações são realizadas 2-3 meses antes do transplante renal. Uma vez que um paciente tenha sido aceito para transplante com um determinado doador vivo, ele será questionado antes do transplante se está interessado em fazer parte do presente estudo. Se o paciente e o doador aceitarem, coletaremos 15 mL de sangue antes do transplante usando tubos de coleta de amostras adequados (tubos de BCT sem células). Esta amostra será usada para triagem de pacientes e doadores para marcadores genéticos específicos. Além disso, as amostras pré-transplante serão utilizadas para determinar a presença ou ausência de anticorpos HLA para cada paciente. Nosso objetivo é incluir até 50 pacientes no estudo atual.

Durante as primeiras 24-48 horas após o transplante, mais duas amostras (10 mL) do paciente serão coletadas para medir a presença potencial de dd-cfDNA, incluindo partículas livres de células, como exossomos. O DNA e o RNA livre de células de todas as amostras serão extraídos, armazenados congelados e posteriormente sequenciados. Após o transplante e o início da terapia imunossupressora, as amostras para análise serão obtidas uma vez por semana por até 3 meses. Todas as amostras coletadas serão analisadas imediatamente ou congeladas para análises futuras. As amostras congeladas armazenadas podem, posteriormente, ser descongeladas, agrupadas e analisadas usando técnicas moleculares, incluindo sequenciamento para medir dd-cfDNA ou análise da presença de anticorpos HLA usando tecnologias comerciais de contas (Luminex ou Immucor). Os resultados desses ensaios serão adicionados a um banco de dados dedicado. Os resultados laboratoriais obtidos serão comparados ao resultado clínico, incluindo sobrevivência do enxerto, sobrevivência do paciente, rejeições clínicas e subclínicas, etc., bem como outros dados laboratoriais (por exemplo, resultados do exame patológico do enxerto, química clínica, concentração de drogas imunossupressoras etc).