Autogeenisten hiukkasten kerääminen implanttileikkauksen aikana
Satunnaistettu kliininen tutkimus, jossa verrataan autogeenisten hiukkasten keräämistä implanttileikkauksen aikana käyttämällä hidasta porausta ilman kastelua ja nopeaa porausta kastelun kanssa
Tavoitteena oli verrata kolmella eri tekniikalla kerättyjen autogeenisten luupartikkelien osteoblastiaktiivisuutta ja osteogeenista potentiaalia, määrittää edullisin tapa kerätä autogeenisiä luupartikkeleita.
Luuhiukkaset kerättiin hammasimplanttileikkauksen aikana käyttämällä hidasnopeuksia ja nopeaa porausta. Osteoblastien viljelyn jälkeen arvioitiin solujen lisääntyminen, migraatio, mineralisaatio, osteogeneesiin liittyvien geenien transkriptio, osteogeneesiin liittyvien proteiinien eritys ja osteoinduktiivinen proteiinipitoisuus luupartikkelimatriisissa.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Tässä tutkimuksessa asetetaan yhteensä 60 yksittäistä hammasimplanttia. Jokainen potilas saa kaksi hammasimplanttia (Espanja), joiden pituus on 10 mm ja halkaisija 4 mm, puuttuvien hampaiden korvaamiseksi oikean ja vasemman alaleuan ensimmäisistä poskihaksista. Leikkaus suoritetaan paikallispuudutuksessa (0,5 % artikaiinia ja epinefriiniä) nostaen limakalvon läppä. Implanttien osteotomiajyrsintäprotokollan satunnaistaminen kussakin hemimandiblessa, online-satunnaistuspalvelu (www.randomization.com) tullaan hyödyntämään.
Jokaisella potilaalla käytetään tavanomaista nopeaa jauhatusprotokollaa huuhtelulla fysiologista suolaliuosta käyttäen. Toisessa hemimandiblessa implantin osteotomia suoritetaan hitaalla jyrsintäprotokollalla ilman kastelua.
Perinteisen nopean jyrsintäprotokollan ja kastelun jyrsintäjärjestys on seuraava: osteotomia käynnistetään halkaisijaltaan 2,0 mm:n merkintäporalla, jota seuraa halkaisijaltaan samanlainen pilottipora. Tämän jälkeen käytetään peräkkäin halkaisijaltaan 2,6/3,2/ ja 3,6 mm poraa. Kaikkia poraa käytetään 800 rpm:n nopeudella ja 10 mm:n syvyydessä.
Toisaalta hitaan jyrsintäprotokollan jyrsintäjärjestys ilman kastelua on sama, mutta kaikkia porakoneita käytetään 50 rpm:n nopeudella (samalla 10 mm:n syvyydellä). Lopuksi, kun hammasimplantti ja sulkuruuvi on asetettu, limakalvon läppä ommellaan yksinkertaisilla ompeleilla käyttämällä synteettistä polyamidiompeleita ilman välitöntä proteesin kuormitusta. Kaikissa tapauksissa leikkauksen jälkeiseen lääkitykseen sisältyy 500 mg/8 h amoksisilliinia 7 päivän ajan (penisilliiniallergiatapauksissa 300 mg/8 h klindamysiini 7 päivän ajan) ja 600 mg/8 h ibuprofeenia 3 päivän ajan.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Arvioitu)
Vaihe
- Ei sovellettavissa
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Aikuinen
- Vanhempi Aikuinen
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Laillinen ikä
- Tietoinen suostumus allekirjoitettu
- Kaksipuolinen alaleuan hampaiden poissaolo 3,6 ja 4,6 yli 3 kuukautta
- Normaali luun tiheys posteriorisessa alaleuan sektorissa tyypin II/III luulla (alue 500-850 HU) Nortonin ja Gamblen luokituksen mukaan
- Ei lääketieteellisiä vasta-aiheita suukirurgisten toimenpiteiden suorittamiselle (ASA I/II).
Poissulkemiskriteerit:
- Minkä tahansa sairauden, tilan tai lääkkeiden esiintyminen, jotka voivat vaarantaa hammasimplanttien paranemisen ja/tai luukudoksen (kuten diabetes mellitus, bisfosfonaattien antaminen tai vaikea osteoporoosi)
- Minkä tahansa vakavan mielenterveyden häiriön esiintyminen
- Potilaat, jotka ovat saaneet pään ja kaulan sädehoitoa edellisten 18 kuukauden aikana.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Hoito
- Jako: Satunnaistettu
- Inventiomalli: Rinnakkaistehtävä
- Naamiointi: Kolminkertaistaa
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kokeellinen: Kontrolliryhmä
Nopea poraus (800 rpm) kastelulla
|
Nopea poraus (800 rpm) kastelu osteotomian suorittamiseksi
|
|
Kokeellinen: Testiryhmä
Hidas poraus (50 rpm) ilman kastelua
|
Hidas poraus (50 rpm) kastelu osteotomian suorittamiseksi
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Tutkimus implantin osteotomian aikana kerättyjen luuhiukkasten koosta, kollageenifibrillien olemassaolosta tai puuttumisesta sekä kalsium- ja fosforitasoista niissä.
Aikaikkuna: päivä 1
|
Kun kerätyn luun määrä on analysoitu, 100 mg luuta käytetään jäljellä oleviin tutkimusmuuttujiin. Luunäytteet upotetaan 37-prosenttiseen fosforihappogeeliin 15 sekunniksi ja pestään sitten runsaalla vedellä jäljellä olevan hapon poistamiseksi. Myöhemmin näytteet kiinnitetään pidikkeisiin tutkittavaksi pyyhkäisyelektronimikroskoopilla sen jälkeen, kun ne on vastaanotettu hiilipinnoitteella. Kun näytteet on visualisoitu 100-kertaisella tarkkuudella, digitaaliset kuvat otetaan analysoitavaksi ImageJ-kuva-analyysiohjelmistolla. Lopuksi kalsium- ja fosforitasot analysoidaan Inca Microanalysis Systems -ohjelmistolla. Koko ilmaistaan nm:nä. |
päivä 1
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Kvantifioi BMP-2:n ja VEGF:n määrä luusta, joka on kerätty implantin osteotomian aikana käyttämällä tavanomaista ja hidasta jyrsintää.
Aikaikkuna: päivä 14
|
Steriilejä Eppendorf-putkia, jotka sisältävät 100 mg kerättyä luuta toisella kahdesta verratusta protokollasta, sentrifugoidaan 217 g:llä 6 minuuttia. Supernatantti kerätään ja sitä käytetään BMP-2:n ja VEGF:n kvantifiointiin käyttämällä ELISA-pakkausta. Toimenpide suoritetaan valmistajan toimittaman protokollan mukaisesti. Absorbanssi 405 nm:ssä mitataan käyttämällä EXL-800-tyypin ELISA-lukijaa. Muuttuja ilmaistaan prosentteina 100 mg:aa kohti |
päivä 14
|
|
Implanttien osteotomian aikana kerättyjen luussa olevien osteoblastien morfologian ja lukumäärän analyysi.
Aikaikkuna: päivä 14
|
Jauhatussekvenssin aikana kerättyjen luussa olevien osteoblastien morfologian ja lukumäärän vertaamiseksi kahteen verrattuun protokollaan 100 mg luuta viljellään välittömästi α-MEM:ssä, jota on täydennetty naudan sikiön seerumilla ja 1 % antibiootilla (penisilliini 10 000 U/ml). ja streptomysiini 10 000 µg/ml) Elatusaine vaihdetaan 3 päivän välein. Viljeltyjen osteoblastien morfologia ja lukumäärä tarkkaillaan 7 ja 14 päivän kohdalla. 40X optisella mikroskoopilla visualisoinnin jälkeen morfologiaa kuvataan normaaliksi tai epänormaaliksi. Muuttuja ilmaistaan prosentteina 100 mg:aa kohti |
päivä 14
|
|
Arvio saostuneiden kalsiumkyhmyjen esiintymisestä osteoblastien soluviljelmässä luun keräämisen jälkeen implantin osteotomian aikana.
Aikaikkuna: päivä 21
|
Vertaaksemme saostuneiden kalsiumkyhmyjen mahdollista esiintymistä osteoblastien soluviljelmässä luun keräämisen jälkeen jauhatussekvenssin aikana kahteen verrattuun protokollaan, käytämme viljeltyjen osteoblastien neljättä siirtoa (21 viljelypäivän kohdalla). Solut pestään PBS:llä, kiinnitetään 75-prosenttisella kylmällä etanolilla 1 tunnin ajan ja inkuboidaan 1 ml:n kanssa 0,1-prosenttista alitsariinipunaista pH:ssa 8,3 (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Espanja) 10 minuuttia. Sitten, jos saostuneita kalsiumkyhmyjä on, ne värjätään punaisiksi ja niitä tarkkaillaan optisen mikroskoopin alla. Lopuksi käytämme liuosta, jossa on 20 % metanolia ja 10 % etikkahappoa 10 minuutin ajan alizariinipunaisen liuottamiseksi. Tulokset ilmaistaan kvalitatiivisesti mittaamalla absorbanssi 550 nm:ssä käyttämällä EXL-800-tyypin ELISA-lukijaa. Muuttuja ilmaistaan prosentteina |
päivä 21
|
|
Solujen elinkelpoisuuden tutkimus (soluproliferaatiomääritys)
Aikaikkuna: päivä 12
|
Käytämme myös viljeltyjen osteoblastien neljättä siirtoa (21 viljelypäivän kohdalla). Solut kylvetään 96-kuoppaisille viljelylevyille tiheydellä 1 x 103 solua kuoppaa kohti. Solujen lisääntyminen arvioidaan 2, 6 ja 12 päivän inkubaatiossa käyttämällä 3-(4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2,5-difenyyli-2H-tetratsoliumbromidi (MTT) -määritystä. Ensin 20 ui MTT:tä (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Espanja) lisätään alustaan ja inkuboidaan 4 tuntia. Tämän jälkeen poistamme väliaineen ja lisäämme 150 µl dimetyylisulfoksidia (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Espanja) kuhunkin kuoppaan. Tulokset analysoidaan mittaamalla absorbanssi 490 nm:ssä. Muuttuja ilmaistaan prosentteina |
päivä 12
|
|
Solusyklin määrittäminen (G0/G1, G2/M ja S)
Aikaikkuna: päivä 21
|
Solusyklin tutkimukseen käytämme myös viljeltyjen osteoblastien neljättä siirtoa (21 viljelypäivän kohdalla). Solut irrotetaan soluviljelypulloista käyttämällä 0,05 % trypsiiniä (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Espanja) ja 0,02 % EDTA:ta. Myöhemmin ne pestään ja suspendoidaan PBS:ään solusyklianalyysiä varten. Soluja inkuboidaan 37 °C:ssa 30 minuuttia 100 ml:n RNaasia (1 mg/ml) ja 100 ml:n propidiumjodidia kanssa. Värjäytyneiden solujen DNA-sisältöä tutkitaan käyttämällä FACSCaliburTM-virtaussytometriä 488 nm:n argonlaserin kanssa eteenpäinsironta- (FSC), sivusironta- (SSC) ja propidiumjodidifluoresenssiintensiteetin (PLA-2) tietojen keräämiseksi 2000 tapahtumasta. Tiedot analysoidaan käyttämällä CELLQUEST-ohjelmistoa ja MODFIT-ohjelmaa, jolloin määritetään solujen prosenttiosuus G0/G1-, G2/M- ja S-vaiheissa. Muuttuja ilmaistaan prosentteina |
päivä 21
|
|
Solujen migraatiokyvyn arviointi
Aikaikkuna: päivä 1
|
Solujen migraatiokyvyn tutkimuksessa käytämme myös viljeltyjen osteoblastien neljättä siirtoa (21 viljelypäivän kohdalla). Solut kylvetään 6-kuoppaisille viljelylevyille tiheydellä 5 x 104 solua per kuoppa ja inkuboidaan 24 tuntia 100 %:n konfluenssin saavuttamiseksi. Tämän jälkeen kuhunkin kuoppaan vedetään 3 rinnakkaista viivaa käyttämällä steriiliä 300 µl:n pipetin kärkeä tyhjien solutilojen luomiseksi, ja solujen migraatiota tarkkaillaan 6, 12 ja 24 tunnin kohdalla. Solujen migraatio määritetään käyttämällä MIP-4.5-kuvaanalyysijärjestelmää. Digitaalisia kuvia kustakin kaivosta 6, 12 ja 24 tunnin kohdalla mitataan 10 riviä eroa/lähestymistapaa tyhjistä solutiloista ja solujen kulkema matka lasketaan kaavalla: migraatioetäisyys = (A0/ 2) - (At/2), jossa A0 on soluttoman tilan alkuleveys ja At on soluttoman tilan leveys 6, 12 tai 24 tunnin kohdalla. Muuttuja ilmaistaan prosentteina |
päivä 1
|
|
Analyysi solujen elinkelpoisuussuhteet luussa, joka on kerätty implantin osteotomian aikana.
Aikaikkuna: päivä 14
|
Osteoblastien solujen elinkykysuhteita tutkitaan päivänä 14. Solut erotetaan soluviljelypulloista käyttämällä 0,05 % trypsiiniä (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Espanja) ja kvantifioidaan käyttämällä Neubauer-kammiota. Sitten solut värjätään trypaanisinisellä solujen elinkelpoisuussuhteiden määrittämiseksi. Muuttuja ilmaistaan prosentteina 100 mg:aa kohti |
päivä 14
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Arvioitu)
Ensisijainen valmistuminen (Arvioitu)
Opintojen valmistuminen (Arvioitu)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvioitu)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Arvioitu)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
- Huumeiden fysiologiset vaikutukset
- Adrenergiset aineet
- Neurotransmitterit
- Farmakologisen vaikutuksen molekyylimekanismit
- Autonomiset agentit
- Ääreishermoston aineet
- Neurotransmitterien sisäänoton estäjät
- Kalvon kuljetusmodulaattorit
- Dopamiini-aineet
- Dopamiinin sisäänoton estäjät
- Keskushermoston stimulaattorit
- Sympatomimeetit
- Adrenergisen sisäänoton estäjät
- Metamfetamiini
Muut tutkimustunnusnumerot
- 26302019
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .