植入手术期间的自体颗粒收获
比较植入手术期间使用低速钻孔（不带冲洗）和高速钻孔（带冲洗）收集自体颗粒的随机临床试验
目的是比较使用三种不同技术收集的自体骨颗粒的成骨细胞活性和成骨潜力，确定收集自体骨颗粒的最有利的方法。
在牙种植手术期间使用低速钻孔和高速钻孔收获骨颗粒。 培养成骨细胞后，评价细胞增殖、迁移、矿化、成骨相关基因转录、成骨相关蛋白分泌以及骨颗粒基质中骨诱导蛋白含量
研究概览
详细说明
本研究将总共植入 60 颗牙种植体。 每位患者将接受两颗种植牙（西班牙），每颗种植体长 10 毫米，直径 4 毫米，用于替换左右下颌第一磨牙缺失的牙齿。 手术将在局部麻醉（0.5% 阿替卡因加肾上腺素）下进行，并抬高粘骨膜瓣。 对于每个半下颌骨的种植体截骨铣削方案的随机化，在线随机化服务 (www.randomization.com) 将被利用。
对于每位患者，将在一个半下颌中采用传统的高速研磨方案并使用生理盐水冲洗。 在另一个半下颌骨中，将使用低速铣削方案进行种植体截骨术，无需冲洗。
带冲洗的传统高速铣削方案的铣削顺序如下：首先使用 2.0 mm 直径的标记钻进行截骨，然后使用相同直径的导向钻。 随后，将连续使用2.6/3.2/和3.6毫米直径的钻头。 所有钻头的使用速度为 800 rpm，深度为 10 mm。
另一方面，无冲洗的低速铣削方案的铣削顺序将相同，但所有钻头将以 50 rpm 的速度使用（在 10 mm 的相同深度）。 最后，一旦插入牙种植体和闭合螺钉，将使用合成聚酰胺缝合线通过简单的缝线缝合粘骨膜瓣，无需立即进行假体装载。 在所有情况下，术后用药包括 500 mg/8 小时阿莫西林，持续 7 天（如果青霉素过敏，则为 300 mg/8 小时克林霉素，持续 7 天），以及 600 mg/8 小时布洛芬，持续 3 天。
研究类型
注册 (估计的)
阶段
- 不适用
参与标准
资格标准
适合学习的年龄
- 成人
- 年长者
接受健康志愿者
描述
纳入标准：
- 法定年龄
- 签署知情同意书
- 双侧下颌缺牙3.6、4.6超过3个月
- 根据 Norton 和 Gamble 分类，下颌后区骨密度正常，II/III 型骨（范围 500-850 HU）
- 没有进行口腔外科手术的医疗禁忌症 (ASA I/II)。
排除标准：
- 存在任何可能影响牙种植体愈合和/或骨整合的疾病、病症或药物（例如糖尿病、双膦酸盐给药或严重骨质疏松症）
- 存在任何严重的精神障碍
- 过去18个月内接受过头颈部放射治疗的患者。
学习计划
研究是如何设计的？
设计细节
- 主要用途：治疗
- 分配：随机化
- 介入模型：并行分配
- 屏蔽：三倍
武器和干预
参与者组/臂 |
干预/治疗 |
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实验性的：控制组
带灌溉的高速钻孔（800 rpm）
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高速钻孔（800 rpm）冲洗以进行截骨术
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实验性的：测试组
低速钻孔（50 rpm），无需灌溉
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低速钻孔（50 rpm）冲洗以进行截骨术
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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研究种植体截骨术期间收集的骨颗粒的大小、胶原纤维是否存在以及其中的钙和磷水平。
大体时间：第一天
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一旦分析了收集的骨骼量，100 毫克骨骼将用于剩余的研究变量。 将骨样本嵌入37%磷酸凝胶中15秒，然后用大量水清洗以除去剩余的酸。 随后，样品在接受碳涂层后将安装在支架上，在扫描电子显微镜下进行检查。 将样品放大 100 倍后，将拍摄数字图像以使用图像分析软件 ImageJ 进行分析。 最后，将使用 Inca Microanalysis Systems 软件分析钙和磷水平。 尺寸以 nm 表示。 |
第一天
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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使用传统和低速铣削对种植体截骨术期间收集的骨骼中的 BMP-2 和 VEGF 进行定量。
大体时间：第 14 天
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使用两种比较方案之一将含有 100 mg 收集骨的无菌 Eppendorf 管在 217 g 下离心 6 分钟。 将收集上清液并使用 ELISA 试剂盒定量 BMP-2 和 VEGF。 该程序将按照制造商提供的协议进行。 将使用 EXL-800 型 ELISA 读数器测量 405 nm 处的吸光度。 该变量将以每 100 毫克的百分比表示 |
第 14 天
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分析种植体截骨期间收集的骨中成骨细胞的形态和数量。
大体时间：第 14 天
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为了比较两种比较方案在铣削过程中收集的骨骼中成骨细胞的形态和数量，将 100 mg 骨骼立即在补充有胎牛血清和 1% 抗生素（青霉素 10,000 U/ml）的 α-MEM 中培养和链霉素 10,000 µg/ml）每 3 天更换一次培养基。 第7天和第14天观察培养的成骨细胞的形态和数量。 在 40 倍光学显微镜下观察后，形态将被描述为正常或异常。 该变量将以每 100 毫克的百分比表示 |
第 14 天
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评估植入截骨期间收集骨后成骨细胞的细胞培养物中沉淀钙结节的存在。
大体时间：第 21 天
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为了比较在研磨过程中收集骨骼后成骨细胞的细胞培养物中可能存在的沉淀钙结节与两个比较方案，我们将使用培养的成骨细胞的第四代（培养第 21 天）。 用 PBS 洗涤细胞，用 75% 冷乙醇固定 1 小时，并与 1 ml 0.1% 茜素红（pH 8.3）（Sigma-Aldrich Quimica S.A.，马德里，西班牙）孵育 10 分钟。 然后，如果有沉淀的钙结节，则将其染成红色，并在光学显微镜下观察。 最后，我们用20%的甲醇和10%的醋酸溶液混合10分钟，使茜素红溶解。 通过使用 EXL-800 型 ELISA 读数器测量 550 nm 处的吸光度来定性表达结果。 该变量将用%表示 |
第 21 天
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细胞活力研究（细胞增殖测定）
大体时间：第 12 天
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我们还将使用第四代培养的成骨细胞（培养 21 天时）。 细胞将以每孔 1 X 103 个细胞的密度接种在 96 孔培养板中。 使用 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物 (MTT) 测定在孵育 2、6 和 12 天时评估细胞增殖。 首先，将 20 µl MTT（Sigma-Aldrich Quimica S.A.，马德里，西班牙）添加到培养基中并孵育 4 小时。 随后，我们将除去培养基并向每个孔中添加 150 µl 二甲基亚砜（Sigma-Aldrich Quimica S.A.，马德里，西班牙）。 将通过测量 490 nm 处的吸光度来分析结果。 该变量将用%表示 |
第 12 天
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细胞周期的测定（G0/G1、G2/M 和 S）
大体时间：第 21 天
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为了研究细胞周期，我们还将使用第四代培养的成骨细胞（培养 21 天时）。 使用 0.05% 胰蛋白酶（Sigma-Aldrich Quimica S.A.，马德里，西班牙）和 0.02% EDTA 将细胞从细胞培养瓶中分离。 然后，将它们洗涤并悬浮在 PBS 中以进行细胞周期分析。 将细胞与 100 ml RNase (1 mg/ml) 和 100 ml 碘化丙啶一起在 37°C 下孵育 30 分钟。 将使用配备 488 nm 氩激光的 FACSCaliburTM 流式细胞仪来研究染色细胞的 DNA 含量，以收集 2000 个事件的前向散射 (FSC)、侧向散射 (SSC) 和碘化丙啶荧光强度 (PLA-2) 数据。 将使用 CELLQUEST 软件和 MODFIT 程序分析数据，确定处于 G0/G1、G2/M 和 S 期的细胞百分比。 该变量将用%表示 |
第 21 天
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细胞迁移能力评估
大体时间：第一天
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为了研究细胞迁移能力，我们还将使用培养的第四代成骨细胞（培养21天）。 细胞将以每孔 5 X 104 个细胞的密度接种在 6 孔培养板中，并孵育 24 小时以达到 100% 汇合。 随后，使用无菌300μl移液器吸头在每个孔中画3条平行线以创建空细胞空间，并在6、12和24小时观察细胞迁移。 将使用 MIP-4.5 图像分析系统确定细胞迁移。 使用每个孔在 6、12 和 24 小时时的数字图像，将测量空细胞空间的 10 条分离/接近线，并使用以下公式计算细胞移动的距离：迁移距离 = (A0/ 2) - (At/2)，其中 A0 是无细胞空间的初始宽度，At 是 6、12 或 24 小时时无细胞空间的宽度。 该变量将用%表示 |
第一天
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分析种植体截骨术期间收集的骨中的细胞活力比率。
大体时间：第 14 天
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第 14 天将研究成骨细胞的细胞活力比率。 使用 0.05% 胰蛋白酶（Sigma-Aldrich Quimica S.A.，马德里，西班牙）从细胞培养瓶中分离细胞，并使用 Neubauer 室进行定量。 然后，细胞将用台盼蓝染色以确定细胞活力比率。 该变量将以每 100 毫克的百分比表示 |
第 14 天
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合作者和调查者
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (估计的)
初级完成 (估计的)
研究完成 (估计的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (估计的)
研究记录更新
最后更新发布 (估计的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
更多信息
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