Raccolta di particelle autogene durante la chirurgia implantare
Uno studio clinico randomizzato che confronta la raccolta di particelle autogene durante la chirurgia implantare utilizzando la perforazione a bassa velocità senza irrigazione e la perforazione ad alta velocità con irrigazione
Lo scopo era confrontare l'attività degli osteoblasti e il potenziale osteogenico delle particelle di osso autologo raccolte utilizzando tre diverse tecniche e determinare il metodo più vantaggioso per raccogliere le particelle di osso autologo.
Le particelle ossee sono state raccolte durante l'intervento di impianto dentale utilizzando la perforazione a bassa velocità e la perforazione ad alta velocità. Dopo che gli osteoblasti sono stati coltivati, sono state valutate la proliferazione cellulare, la migrazione, la mineralizzazione, la trascrizione dei geni correlati all'osteogenesi, la secrezione di proteine correlate all'osteogenesi e il contenuto di proteine osteoinduttive nella matrice delle particelle ossee.
Panoramica dello studio
Stato
Condizioni
Descrizione dettagliata
In questo studio verranno inseriti un totale di 60 impianti dentali individuali. Ogni paziente riceverà due impianti dentali (Spagna), ciascuno di 10 mm di lunghezza e 4 mm di diametro, per la sostituzione dei denti mancanti nei primi molari mandibolari destro e sinistro. L'intervento verrà eseguito in anestesia locale (articaina 0,5% con epinefrina) con sollevamento di un lembo mucoperiostale. Per la randomizzazione del protocollo di fresatura dell'osteotomia implantare in ciascuna emimandibola, è disponibile un servizio di randomizzazione online (www.randomization.com) verrà utilizzato.
In ciascun paziente, in un'emimandibola verrà impiegato il protocollo convenzionale di fresatura ad alta velocità con irrigazione utilizzando soluzione salina fisiologica. Nell'altra emimandibola, l'osteotomia implantare verrà eseguita utilizzando un protocollo di fresatura a bassa velocità senza irrigazione.
La sequenza di fresatura per il protocollo di fresatura convenzionale ad alta velocità con irrigazione sarà la seguente: l'osteotomia verrà iniziata con una fresa marcante da 2,0 mm di diametro, seguita da una fresa pilota dello stesso diametro. Successivamente verranno utilizzate frese consecutivamente di diametro 2.6/3.2/ e 3.6 mm. Tutte le frese verranno utilizzate ad una velocità di 800 giri al minuto e ad una profondità di 10 mm.
La sequenza di fresatura per il protocollo di fresatura a bassa velocità senza irrigazione sarà invece la stessa, ma tutte le frese verranno utilizzate ad una velocità di 50 giri/min (alla stessa profondità di 10 mm). Infine, una volta inserito l'impianto dentale e la vite di chiusura, il lembo mucoperiosteo verrà suturato con semplici punti utilizzando sutura in poliammide sintetica, senza carico protesico immediato. In tutti i casi, la terapia postoperatoria includerà 500 mg/8 ore di amoxicillina per 7 giorni (in caso di allergia alla penicillina, 300 mg/8 ore di clindamicina per 7 giorni) e 600 mg/8 ore di ibuprofene per 3 giorni.
Tipo di studio
Iscrizione (Stimato)
Fase
- Non applicabile
Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
- Adulto
- Adulto più anziano
Accetta volontari sani
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Età legale
- Consenso informato firmato
- Assenza dentale mandibolare bilaterale di 3,6 e 4,6 per più di 3 mesi
- Densità ossea normale nel settore mandibolare posteriore con osso di tipo II/III (range 500-850 HU) secondo la classificazione di Norton e Gamble
- Nessuna controindicazione medica per l'esecuzione di interventi di chirurgia orale (ASA I/II).
Criteri di esclusione:
- Presenza di qualsiasi malattia, condizione o farmaco che possa compromettere la guarigione e/o l'osteointegrazione degli impianti dentali (come diabete mellito, somministrazione di bifosfonati o osteoporosi grave)
- Presenza di qualsiasi disturbo mentale grave
- Pazienti sottoposti a radioterapia della testa e del collo nei 18 mesi precedenti.
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Scopo principale: Trattamento
- Assegnazione: Randomizzato
- Modello interventistico: Assegnazione parallela
- Mascheramento: Triplicare
Armi e interventi
Gruppo di partecipanti / Arm |
Intervento / Trattamento |
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Sperimentale: Gruppo di controllo
Perforazione ad alta velocità (800 giri/min) con irrigazione
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Irrigazione con perforazione ad alta velocità (800 giri/min) per eseguire l'osteotomia
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Sperimentale: Gruppo di prova
Foratura a bassa velocità (50 giri/min) senza irrigazione
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Irrigazione con fresa a bassa velocità (50 giri/min) per eseguire l'osteotomia
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Studio della dimensione delle particelle ossee raccolte durante l'osteotomia implantare, della presenza o assenza di fibrille di collagene e dei livelli di calcio e fosforo in esse contenute.
Lasso di tempo: giorno 1
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Una volta analizzata la quantità di osso raccolto, 100 mg di osso verranno utilizzati per le rimanenti variabili dello studio. I campioni ossei verranno immersi in un gel di acido fosforico al 37% per 15 secondi e poi lavati con abbondante acqua per rimuovere l'acido rimanente. Successivamente, i campioni verranno montati su supporti per l'esame al microscopio elettronico a scansione dopo aver ricevuto un rivestimento di carbonio. Dopo aver visualizzato i campioni a 100X, le immagini digitali verranno prese per l'analisi utilizzando il software di analisi delle immagini ImageJ. Infine, i livelli di calcio e fosforo verranno analizzati utilizzando il software Inca Microanalysis Systems. La dimensione sarà espressa in nm. |
giorno 1
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Quantificare BMP-2 e VEGF nell'osso raccolto durante l'osteotomia dell'impianto utilizzando la fresatura convenzionale e a bassa velocità.
Lasso di tempo: giorno 14
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Le provette Eppendorf sterili contenenti 100 mg di osso raccolto con uno dei due protocolli confrontati verranno centrifugate a 217 g per 6 minuti. Il surnatante verrà raccolto e utilizzato per quantificare BMP-2 e VEGF utilizzando un kit ELISA. La procedura verrà effettuata seguendo il protocollo fornito dal produttore. L'assorbanza a 405 nm sarà misurata utilizzando un lettore ELISA tipo EXL-800. La variabile sarà espressa in % per 100 mg |
giorno 14
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Analisi della morfologia e del numero degli osteoblasti nell'osso raccolti durante l'osteotomia implantare.
Lasso di tempo: giorno 14
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Per confrontare la morfologia e il numero di osteoblasti nell'osso raccolti durante la sequenza di fresatura con i due protocolli comparati, i 100 mg di osso verranno immediatamente coltivati in α-MEM integrato con siero fetale bovino e antibiotico all'1% (penicillina 10.000 U/ml e streptomicina 10.000 µg/ml) Il terreno di coltura verrà cambiato ogni 3 giorni. La morfologia e il numero degli osteoblasti in coltura saranno osservati a 7 e 14 giorni. Dopo la visualizzazione al microscopio ottico 40X, la morfologia verrà descritta come normale o anormale. La variabile sarà espressa in % per 100 mg |
giorno 14
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Valutazione della presenza di noduli di calcio precipitato nella coltura cellulare di osteoblasti dopo il prelievo osseo durante l'osteotomia implantare.
Lasso di tempo: giorno 21
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Per confrontare l'eventuale presenza di noduli di calcio precipitato nella coltura cellulare degli osteoblasti dopo il prelievo osseo durante la sequenza di fresatura con i due protocolli a confronto, utilizzeremo il quarto passaggio di osteoblasti in coltura (a 21 giorni di coltivazione). Le cellule verranno lavate con PBS, fissate con etanolo freddo al 75% per 1 ora e incubate con 1 ml di rosso alizarina allo 0,1% a pH 8,3 (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Spagna) per 10 minuti. Quindi, se sono presenti noduli di calcio precipitati, verranno colorati di rosso e osservati al microscopio ottico. Infine, utilizzeremo una soluzione al 20% di metanolo e al 10% di acido acetico per 10 minuti per sciogliere il rosso alizarina. I risultati saranno espressi qualitativamente misurando l'assorbanza a 550 nm utilizzando un lettore ELISA tipo EXL-800. La variabile sarà espressa in % |
giorno 21
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Studio della vitalità cellulare (saggio di proliferazione cellulare)
Lasso di tempo: giorno 12
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Utilizzeremo anche il quarto passaggio di osteoblasti in coltura (a 21 giorni di coltivazione). Le cellule verranno seminate in piastre di coltura da 96 pozzetti ad una densità di 1 X 103 cellule per pozzetto. La proliferazione cellulare sarà valutata a 2, 6 e 12 giorni di incubazione utilizzando il test del 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil-2H-tetrazolio bromuro (MTT). Innanzitutto, 20 µl di MTT (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Spagna) verranno aggiunti al terreno e incubati per 4 ore. Successivamente, rimuoveremo il terreno e aggiungeremo in ciascun pozzetto 150 µl di dimetilsolfossido (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Spagna). I risultati verranno analizzati misurando l'assorbanza a 490 nm. La variabile sarà espressa in % |
giorno 12
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Determinazione del ciclo cellulare (G0/G1, G2/M e S)
Lasso di tempo: giorno 21
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Per lo studio del ciclo cellulare utilizzeremo anche il quarto passaggio di osteoblasti in coltura (a 21 giorni di coltivazione). Le cellule verranno staccate dalle fiasche di coltura cellulare utilizzando 0,05% di trypsin (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Spagna) e 0,02% EDTA. Successivamente, saranno lavate e sospese in PBS per l'analisi del ciclo cellulare. Le cellule verranno incubate a 37º C per 30 minuti con 100 ml di RNasi (1 mg/ml) e 100 ml di ioduro di propidio. Il contenuto di DNA delle cellule colorate sarà studiato utilizzando un citometro a flusso FACSCaliburTM con un laser ad argon da 488 nm per raccogliere dati di diffusione diretta (FSC), diffusione laterale (SSC) e intensità di fluorescenza dello ioduro di propidio (PLA-2) da 2000 eventi. I dati verranno analizzati utilizzando il software CELLQUEST e il programma MODFIT, determinando la percentuale di cellule nelle fasi G0/G1, G2/M e S. La variabile sarà espressa in % |
giorno 21
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Valutazione della capacità di migrazione cellulare
Lasso di tempo: giorno 1
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Per lo studio della capacità di migrazione cellulare utilizzeremo anche il quarto passaggio degli osteoblasti in coltura (a 21 giorni di coltivazione). Le cellule verranno seminate in piastre di coltura da 6 pozzetti ad una densità di 5 X 104 cellule per pozzetto e incubate per 24 ore per raggiungere una confluenza del 100%. Successivamente, verranno tracciate 3 linee parallele in ciascun pozzetto utilizzando una punta di pipetta sterile da 300 µl per creare spazi cellulari vuoti e la migrazione cellulare sarà osservata a 6, 12 e 24 ore. La migrazione cellulare sarà determinata utilizzando il sistema di analisi delle immagini MIP-4.5. Utilizzando le immagini digitali di ciascun pozzetto a 6, 12 e 24 ore, verranno misurate 10 linee di separazione/avvicinamento degli spazi vuoti delle cellule e la distanza percorsa dalle cellule sarà calcolata utilizzando la formula: distanza di migrazione = (A0/ 2) - (At/2), dove A0 è la larghezza iniziale dello spazio libero dalle cellule e At è la larghezza dello spazio libero dalle cellule a 6, 12 o 24 ore. La variabile sarà espressa in % |
giorno 1
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Analisi dei rapporti di vitalità cellulare nell'osso raccolto durante l'osteotomia implantare.
Lasso di tempo: giorno 14
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I rapporti di vitalità cellulare degli osteoblasti saranno studiati il giorno 14. Le cellule verranno separate dalle fiasche di coltura cellulare utilizzando 0,05% di trypsin (Sigma-Aldrich Quimica S.A., Madrid, Spagna) e quantificate utilizzando una camera di Neubauer. Successivamente, le cellule verranno colorate con trypan blue per determinare i rapporti di vitalità cellulare. La variabile sarà espressa in % per 100 mg |
giorno 14
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (Stimato)
Completamento primario (Stimato)
Completamento dello studio (Stimato)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Stimato)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Stimato)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
- Effetti fisiologici delle droghe
- Agenti adrenergici
- Agenti neurotrasmettitori
- Meccanismi molecolari dell'azione farmacologica
- Agenti autonomi
- Agenti del sistema nervoso periferico
- Inibitori dell'assorbimento dei neurotrasmettitori
- Modulatori di trasporto a membrana
- Agenti dopaminergici
- Inibitori dell'assorbimento della dopamina
- Stimolanti del sistema nervoso centrale
- Simpaticomimetici
- Inibitori dell'assorbimento adrenergico
- Metanfetamina
Altri numeri di identificazione dello studio
- 26302019
Piano per i dati dei singoli partecipanti (IPD)
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Informazioni su farmaci e dispositivi, documenti di studio
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