Autoflor - Lyofilisoitu kapseloitu autologinen FMT palauttamaan suoliston mikrobiomin antibioottihoidon jälkeen (FMT)

Antibioottien käytöllä on myös lyhyen ja pitkän aikavälin haittoja yksilölle. Aikuisilla ihmisillä tehdyissä kokeissa antibioottien suun kautta saannin on osoitettu vaikuttavan merkittävästi suoliston mikrobiotaan vähentämällä monimuotoisuutta ja muuttamalla koostumusta sekä levittämällä antibioottiresistenssigeenejä (AR).

Pakastekuivatuilla FMT-tuotteilla on pitkäkestoinen ulosteen mikrobiston stabiilisuus, joka on hyödyllinen kapselointiin. Myös sulatukseen tarvittavien kapseleiden määrä on paljon pienempi verrattuna tuoreen tai pakastetun materiaalin käyttöön.

Odotamme 25 %:n keskeyttämistä rekrytoimme 40 tervettä aikuista, iältään 18-40 vuotta. Osallistujien tulehdustila rekrytoinnin yhteydessä testataan ottamalla verinäytteitä. Osallistujien ulosteista otetaan 100-150g näyte. Ulosteet tutkitaan mahdollisten haitallisten patogeenien varalta.

50 g kerättyä ulostetta käsitellään 6 tunnin kuluessa siirrosta, laimennetaan 0,85 % NaCl:iin, homogenoidaan sekoittimella. Ulostesuspensio suodatetaan steriloitujen metalliseulojen läpi biologisen turvakaapin alla. Sitten suspensio sentrifugoidaan. Supernatantti dekantoidaan sitten uusiin sentrifugiputkiin ja sentrifugoidaan. Ylempi bakteeripelletti suspendoidaan uudelleen isotoniseen natriumkloridiin, jossa on 10 % trehaloosia. Suspensiota säilytetään -80 °C:ssa enintään kaksi viikkoa ennen lyofilisointia. Liuos lyofilisoidaan Lyoquest plus Ae85C:ssä (Telstar, Tarrasa, Espanja) 44 tunnin ajan, ja saatu tuote kapseloidaan hypromelloosikapseleihin (koot 0, Capsugel Enprotect, Cambridge, MA, USA) ja säilytetään 4 °C:ssa. Protokollaa sovelletaan aiemmista tutkimuksista kapseloidulla FMT:llä. Jokainen kapseli sisältää noin 0,35 g lyofilisoitua ulosteuutetta. O'boy kuumaa suklaajauhetta käytetään lumelääkkeenä.

30 osallistujaa satunnaistetaan ja kaksoissokkotetaan kahteen ryhmään, joissa kussakin on 15 henkilöä. Kaikille osallistujille annetaan 5 päivän (päivät 1-5, kuva 1) amoksisilliini + klavulanaatti 875/125 mg × 2 -kuori.

Ryhmän A interventioryhmä. Osallistujille annetaan 4 kapselia, jotka sisältävät ulostetta (kapseli 1) antibioottihoidon jälkeen päivänä 7.

Ryhmä B Kontrolliryhmä. Osallistujille annetaan 4 plasebokapselia (kapseli 2) antibioottihoidon jälkeen päivänä 7.

Ryhmälle B annetaan FMT-kapseleita (kapselit 1) "pelastushoitona" päivänä 28. Ryhmälle A annetaan lumelääkettä (kapselit 2) edellä kuvatulla tavalla.

Kapselit (kapselit ajankohdissa 1 ja 2) annetaan tutkimusryhmän valvonnassa. Kapselit niellään mehun kanssa. Osallistujia pyydetään olemaan kirkkaalla nestemäisellä ruokavaliolla 8 tuntia ennen interventiota. Mitään kiinteää ruokaa ei saa syödä kahden tunnin kuluessa kapseleiden sulattamisesta. Muuten ruokavalion rajoituksia ei pidetä tarpeellisena. Vierailun aikana osallistujia haastatellaan ja varmistetaan, ettei infektion merkkejä ole ilmennyt eikä suolen toiminnassa ole tapahtunut merkittäviä muutoksia.

Ulostenäytteet kerätään kaikilta osallistujilta viikoittain alkaen päivästä 6 7 viikon ajan päivään 48 (yhteensä 7 näytettä (3 pulloa/näyte)). Tutkimusnäytteitä säilytetään ulosteenkeräysastioissa kotipakastimessa (-18°C), kunnes tutkimushenkilöstö kerää ne ja säilytetään siellä -80°C:ssa. Kalprotektiininäytteitä säilytetään jääkaapissa, kunnes tutkimushenkilöstö kerää ne.

Osallistujat täyttävät kyselylomakkeen, joka sisältää kysymykset mahdollisista vatsaoireista, ulostamistiheydestä, ulosteiden koostumuksesta, vatsakipuista, pahoinvoinnista ja muista käytetyistä lääkkeistä viikoittain 7 viikon ajan. Ylimääräisten antibioottien käyttö seurantajakson aikana johtaa keskeyttämiseen. Osallistujat suorittavat elämänlaatututkimuksen (HRQoL) päivänä 1 (antibioottien käyttöönotto), päivänä 7, kun suoritetaan auto-FMT/plasebo (ensimmäinen interventio), päivänä 28 (toinen interventio) ja seuraavana päivänä -up-jakso (päivä 48) (http://www.15d-instrument.net/15d/).

Osallistujat, joilla on kuumetta, vetistä ripulia (> 3 löysää ulostetta 24 tunnissa), verisiä ulosteita, vatsakipuja ja kouristuksia) testataan C. difficile -bakteerin varalta. Kuumeessa CRP-tasoa ja täydellistä verenkuvaa valvotaan. Osallistujat, joilla on verinen uloste, suljetaan pois tutkimuksesta.

Verinäytteet otetaan päivinä 7, 9, 28 ja 30. Kerätään 5 ml verta (C-reaktiivinen proteiini, plasma).