Autoflor – liofilizált kapszulázott autologikus FMT a bél mikrobiómának helyreállítására antibiotikus kezelés után (FMT)

Az antibiotikumok használatának rövid és hosszú távú hátrányai is vannak az egyén számára. Humán felnőttekkel végzett kísérletekben kimutatták, hogy az antibiotikumok szájon át történő bevitele jelentősen befolyásolja a bél mikrobiotáját a diverzitás csökkentésével és az összetétel megváltoztatásával, valamint az antibiotikum rezisztencia gének (AR) terjedésével.

A fagyasztva szárított FMT termékek hosszan tartó bélsár mikrobióta stabilitással rendelkeznek, amely hasznos a kapszulázáshoz. Az emésztéshez szükséges kapszulák mennyisége is jóval alacsonyabb, mint a friss vagy fagyasztott anyag felhasználásával.

25%-os lemorzsolódásra számítva 40 egészséges, 18-40 év közötti felnőttet veszünk fel. A toborzáskor a résztvevők gyulladásos állapotát vérminták vételével vizsgálják. A résztvevők székletéből 100-150 g-os mintát veszünk. A székletet megvizsgálják a lehetséges káros kórokozók szempontjából.

Az összegyűjtött széklet 50 g-ját az áthaladás után 6 órán belül feldolgozzuk, 0,85%-os NaCl-dal hígítjuk, keverővel homogenizáljuk. A székletszuszpenziót sterilizált fémszitákon szűrjük át biológiai biztonsági szekrény alatt. A szuszpenziót ezután centrifugáljuk. A felülúszót ezután új centrifugacsövekbe dekantáljuk és centrifugáljuk. A felső bakteriális pelletet 10% trehalózt tartalmazó izotóniás nátrium-kloridban újraszuszpendáljuk. A szuszpenziót liofilizálás előtt két hétig -80 °C-on tároljuk. Az oldatot Lyoquest plus Ae85C-ben (Telstar, Tarrasa, Spanyolország) liofilizáljuk 44 órán át, majd a kapott terméket hipromellóz kapszulákba kapszulázzuk (0-s méret, Capsugel Enprotect, Cambridge, MA, USA) és 4 °C-on tároljuk. A protokollt korábbi, kapszulázott FMT-vel végzett vizsgálatokból alkalmazták. Minden kapszula körülbelül 0,35 g liofilizált székletkivonatot tartalmaz. Az O'boy forró csokoládéport placeboként használják.

A 30 résztvevőt véletlenszerűen és kettős vakon két csoportra osztják, mindegyikben 15 alany van. Minden résztvevő 5 napos (1-5. nap, 1. ábra) Amoxicillin + Clavulanate 875/125 mg × 2 kúrát kap.

A csoport Intervenciós csoport. A résztvevők 4 székletet tartalmazó kapszulát (1. kapszula) kapnak a 7. napon végzett antibiotikumos kezelés után.

B csoport Kontroll csoport. A résztvevők 4 placebo kapszulát (2. kapszula) kapnak a 7. napon végzett antibiotikumos kezelés után.

A B csoport „mentőterápiaként” FMT kapszulát (1. kapszula) kap a 28. napon. Az A csoport placebót (2. kapszula) kap a korábban leírtak szerint.

A kapszulákat (kapszulák az 1. és 2. időpontban) a kutatócsoport felügyelete mellett adják be. A kapszulákat lével kell lenyelni. A résztvevőket arra kérik, hogy a beavatkozás előtt 8 órával tiszta, folyékony diétát tartsanak. A kapszulák megemésztését követő két órán belül nem szabad szilárd ételt fogyasztani. Ellenkező esetben az étrend korlátozása nem szükséges. A látogatás során a résztvevőkkel interjút készítenek, és meggyőződtek arról, hogy nem jelentkeztek fertőzésre utaló jelek, és nem történt jelentős változás a bélműködésben.

Minden résztvevőtől hetente ürülékmintát vesznek, a 6. naptól kezdve 7 héten át a 48. napig (összesen 7 minta (3 fiola/minta)). A vizsgálati mintákat székletgyűjtő edényekben, otthoni fagyasztóban (-18 °C) tároljuk, amíg a vizsgálati személyzet össze nem gyűjti, majd ott –80 °C-on tárolja. A kalprotektin mintákat hűtőszekrényben tároljuk, amíg a vizsgálati személyzet be nem gyűjti.

A résztvevők 7 hétig hetente töltenek ki egy kérdőívet, amely tartalmazza a hasi tüneteket, a székletürítés gyakoriságát, a széklet állagát, a hasi fájdalmat, az émelygést és az egyéb használt gyógyszereket. További antibiotikumok alkalmazása a követési időszakban lemorzsolódáshoz vezet. A résztvevők az 1. napon (az antibiotikumok bevezetése), a 7. napon, amikor auto-FMT/placebót (első beavatkozás) végeznek, a 28. napon (második beavatkozás) és az azt követő kezelés végén töltenek ki egy életminőség- (HRQoL) felmérést. -up időszak (48. nap) (http://www.15d-instrument.net/15d/).

A lázas, vizes hasmenésben (> 3 laza széklet 24 órán belül), véres székletben, hasi fájdalomban és görcsökben szenvedő résztvevőket C. difficile-re vizsgálják. Láz esetén a CRP szintet és a teljes vérképet ellenőrzik. A véres székletű résztvevőket kizárják a vizsgálatból.

Vérmintavétel a 7., 9., 28. és 30. napon történik. 5 ml vért gyűjtenek (C-reaktív fehérje, plazma).