Autoflor - FMT autologico capsulato liofilizzato per ripristinare il microbioma intestinale dopo il trattamento con antibiotici (FMT)

L’uso degli antibiotici presenta anche degli svantaggi a breve e lungo termine per l’individuo. Negli studi condotti su esseri umani adulti, è stato dimostrato che l’assunzione orale di antibiotici influenza notevolmente il microbiota intestinale, riducendone la diversità e alterandone la composizione, nonché diffondendo i geni di resistenza agli antibiotici (AR).

I prodotti FMT liofilizzati hanno una stabilità duratura del microbiota fecale utile per l'incapsulamento. Anche la quantità di capsule necessarie per la digestione è molto inferiore rispetto all'utilizzo di materiale fresco o congelato.

Prevedendo un abbandono del 25% recluteremo 40 adulti sani di età compresa tra 18 e 40 anni. Lo stato infiammatorio dei partecipanti al momento del reclutamento sarà testato prelevando campioni di sangue. Viene ottenuto un campione di 100-150 g delle feci dei partecipanti. Le feci verranno testate per potenziali agenti patogeni dannosi.

50 g di feci raccolte vengono processate entro 6 ore dal passaggio, diluite in NaCl allo 0,85%, omogeneizzate utilizzando un mixer. La sospensione fecale viene filtrata attraverso setacci metallici sterilizzati sotto cappa di sicurezza biologica. La sospensione viene quindi centrifugata. Il surnatante viene quindi travasato in nuove provette da centrifuga e centrifugato. Il pellet batterico superiore viene risospeso in cloruro di sodio isotonico con trealosio al 10%. La sospensione viene conservata a -80°C fino a due settimane prima di essere liofilizzata. La soluzione viene liofilizzata in un Lyoquest plus Ae85C (Telstar, Tarrasa, Spagna) per 44 ore e il prodotto risultante viene incapsulato in capsule di ipromellosa (dimensioni 0, Capsugel Enprotect, Cambridge, MA, USA) e conservato a 4°C. Il protocollo viene applicato da studi precedenti con FMT capsulato. Ogni capsula contiene circa 0,35 g di estratto di feci liofilizzato. La polvere di cioccolata calda O'boy viene utilizzata come placebo.

I 30 partecipanti sono randomizzati e in doppio cieco in due gruppi, ciascuno composto da 15 soggetti. A tutti i partecipanti verrà somministrato un ciclo di 5 giorni (giorni 1-5, Figura 1) di amoxicillina + clavulanato 875/125 mg × 2.

Gruppo A Gruppo di intervento. Ai partecipanti verranno somministrate 4 capsule contenenti materia fecale (capsula 1) dopo il trattamento con antibiotici il giorno 7.

Gruppo B Gruppo di controllo. Ai partecipanti verranno somministrate 4 capsule di placebo (capsula 2) dopo il trattamento con antibiotici il giorno 7.

Al gruppo B verranno somministrate capsule FMT (capsule 1) come "terapia di salvataggio" il giorno 28. Al gruppo A verrà somministrato il placebo (capsule 2) come descritto in precedenza.

Le capsule (capsule ai punti temporali 1 e 2) vengono somministrate sotto la supervisione del gruppo di ricerca. Le capsule vengono deglutite con succo. Ai partecipanti viene chiesto di seguire una dieta liquida chiara per 8 ore prima dell'intervento. Nessun cibo solido deve essere assunto entro due ore dalla digestione delle capsule. Altrimenti non sono considerate necessarie restrizioni alla dieta. Durante la visita i partecipanti vengono intervistati e ci si assicura che non si siano verificati segni di infezione e che non si siano verificati cambiamenti significativi nella funzione intestinale.

I campioni fecali verranno raccolti da tutti i partecipanti settimanalmente a partire dal giorno 6 per 7 settimane fino al giorno 48 (totale 7 campioni (3 fiale/campione)). I campioni dello studio vengono conservati in contenitori per la raccolta delle feci nel congelatore domestico (-18°C) fino al momento della raccolta da parte del personale dello studio e successivamente conservati a -80°C. I campioni di calprotectina vengono conservati in frigorifero fino al momento del ritiro da parte del personale dello studio.

I partecipanti compileranno un questionario comprendente domande su eventuali sintomi addominali, frequenza della defecazione, consistenza delle feci, dolore addominale, nausea e altri farmaci utilizzati settimanalmente fino a 7 settimane. L'uso di ulteriori antibiotici durante il periodo di follow-up porta all'abbandono. I partecipanti completano un sondaggio sulla qualità della vita (HRQoL) al giorno 1 (introduzione di antibiotici), al giorno 7 quando viene eseguito auto-FMT/placebo (primo intervento), al giorno 28 (secondo intervento) e alla fine del follow periodo di preparazione (giorno 48) (http://www.15d-instrument.net/15d/).

I partecipanti con febbre, diarrea acquosa (> 3 feci molli in 24 ore), feci con sangue, dolore addominale e crampi) vengono testati per C. difficile. In caso di febbre, vengono controllati il ​​livello di PCR e l'emocromo completo. I partecipanti con feci sanguinolente saranno esclusi dallo studio.

I campioni di sangue verranno prelevati nei giorni 7, 9, 28 e 30. Vengono raccolti 5 ml di sangue (proteina C-reattiva, plasma).