Autoflor – lyofilizovaná kapsulovaná autologická FMT pro obnovu střevního mikrobiomu po léčbě antibiotiky (FMT)

Užívání antibiotik má pro jednotlivce i krátkodobé a dlouhodobé nevýhody. Ve studiích s dospělými lidmi bylo prokázáno, že perorální příjem antibiotik výrazně ovlivňuje střevní mikroflóru snížením diverzity a změnou složení a také šířením genů rezistence na antibiotika (AR).

Lyofilizované produkty FMT mají dlouhodobou stabilitu fekální mikroflóry užitečné pro zapouzdření. Množství kapslí potřebných ke strávení je také mnohem nižší ve srovnání s použitím čerstvého nebo zmrazeného materiálu.

Očekáváme 25% výpadek, přijmeme 40 zdravých dospělých ve věku 18-40 let. Zánětlivý stav účastníků při náboru bude testován odběrem krve. Získá se 100-150g vzorek výkalů účastníků. Výkaly budou testovány na potenciální škodlivé patogeny.

50g odebrané stolice se zpracuje do 6 hodin po pasáži, zředí se v 0,85% NaCl, homogenizuje se pomocí mixéru. Fekální suspenze se filtruje přes sterilizovaná kovová síta pod biologickou bezpečnostní skříní. Suspenze se poté odstředí. Supernatant se pak dekantuje do nových centrifugačních zkumavek a centrifuguje. Horní bakteriální peleta se resuspenduje v izotonickém chloridu sodném s 10% trehalózou. Suspenze se skladuje při -80 °C až dva týdny před lyofilizací. Roztok se lyofilizuje v Lyoquest plus Ae85C (Telstar, Tarrasa, Španělsko) po dobu 44 hodin a výsledný produkt se zapouzdří do hypromelózových kapslí (velikost 0, Capsugel Enprotect, Cambridge, MA, USA) a skladuje se při 4 °C. Protokol je aplikován z předchozích studií se zapouzdřeným FMT. Každá kapsle obsahuje přibližně 0,35 g lyofilizovaného extraktu ze stolice. O'boy prášek z horké čokolády se používá jako placebo.

30 účastníků je randomizováno a dvojitě zaslepeno do dvou skupin, z nichž každá má 15 subjektů. Všichni účastníci dostanou 5denní (den 1-5, obrázek 1) amoxicilin + klavulanát 875/125 mg × 2.

Skupina A Intervenční skupina. Účastníci dostanou 4 kapsle obsahující fekálie (kapsle 1) po léčbě antibiotiky v den 7.

Skupina B Kontrolní skupina. Účastníci dostanou 4 kapsle placeba (kapsle 2) po léčbě antibiotiky v den 7.

Skupině B budou 28. den podány kapsle FMT (kapsle 1) jako „záchranná terapie“. Skupině A bude podáváno placebo (kapsle 2), jak bylo popsáno výše.

Kapsle (kapsle v časových bodech 1 a 2) jsou podávány pod dohledem výzkumného týmu. Tobolky se polykají se šťávou. Účastníci jsou požádáni, aby byli na čisté tekuté stravě po dobu 8 hodin před intervencí. Do dvou hodin po strávení tobolek se nesmí přijímat žádná pevná strava. V opačném případě nejsou žádná omezení ve stravě považována za nutná. Během návštěvy jsou účastníci dotazováni a je zajištěno, že se neobjevily žádné známky infekce a že nedošlo k žádným významným změnám ve funkci střev.

Vzorky stolice budou odebírány od všech účastníků týdně počínaje dnem 6 po dobu 7 týdnů až do dne 48 (celkem 7 vzorků (3 lahvičky/vzorek)). Studované vzorky jsou uloženy ve sběrných nádobách na stolici v domácím mrazáku (-18 °C), dokud je neodeberou pracovníci studie, a tam jsou uloženy při -80 °C. Vzorky kalprotektinu se uchovávají v chladničce, dokud je neodebere personál studie.

Účastníci budou každý týden po dobu 7 týdnů vyplňovat dotazník obsahující otázky týkající se jakýchkoli břišních příznaků, frekvence defekace, konzistence stolice, bolesti břicha, nevolnosti a dalších užívaných léků. Užívání dalších antibiotik během období sledování vede k vysazení. Účastníci dokončí průzkum kvality života (HRQoL) 1. den (zavedení antibiotik), 7. den, kdy se provádí auto-FMT/placebo (první intervence), 28. den (druhá intervence) a na konci sledování -up period (den 48) (http://www.15d-instrument.net/15d/).

Účastníci s horečkou, vodnatým průjmem (> 3 řídká stolice za 24 hodin), krvavou stolicí, bolestmi břicha a křečemi) jsou testováni na C. difficile. V případě horečky se kontroluje hladina CRP a kompletní krevní obraz. Účastníci s krvavou stolicí budou ze studie vyloučeni.

Vzorky krve budou odebrány 7., 9., 28. a 30. den. Odebere se 5 ml krve (C-reaktivní protein, plazma).