Autoflor – Liofilizowany, kapsułkowany autologiczny FMT do przywracania mikrobiomu jelitowego po leczeniu antybiotykami (FMT)

Stosowanie antybiotyków ma również krótko- i długoterminowe wady dla jednostki. W badaniach na dorosłych ludziach wykazano, że doustne przyjmowanie antybiotyków znacząco wpływa na mikroflorę jelitową, zmniejszając jej różnorodność i zmieniając skład, a także rozprzestrzeniając się genów oporności na antybiotyki (AR).

Liofilizowane produkty FMT charakteryzują się długotrwałą stabilnością mikroflory kałowej przydatnej do kapsułkowania. Ilość kapsułek potrzebnych do strawienia jest również znacznie mniejsza w porównaniu do stosowania świeżego lub mrożonego materiału.

Przewidując, że odsetek osób porzucających naukę na poziomie 25%, zatrudnimy 40 zdrowych dorosłych w wieku od 18 do 40 lat. Stan zapalny uczestników podczas rekrutacji będzie sprawdzany poprzez pobranie próbek krwi. Pobiera się próbkę kału uczestników o masie 100–150 g. Kał zostanie zbadany pod kątem potencjalnych szkodliwych patogenów.

W ciągu 6 godzin od pasażu przetwarza się 50 g zebranego stolca, rozcieńcza się go 0,85% NaCl i homogenizuje za pomocą mieszalnika. Zawiesinę kału filtruje się przez wysterylizowane metalowe sita w komorze bezpieczeństwa biologicznego. Następnie zawiesinę odwirowuje się. Następnie supernatant zlewa się do nowych probówek wirówkowych i odwirowuje. Górny osad bakteryjny zawiesza się w izotonicznym chlorku sodu z 10% trehalozą. Zawiesinę przechowuje się w temperaturze -80°C do dwóch tygodni przed liofilizacją. Roztwór liofilizowano w Lyoquest plus Ae85C (Telstar, Tarrasa, Hiszpania) przez 44 godziny, a uzyskany produkt kapsułkowano w kapsułkach z hypromelozy (rozmiar 0, Capsugel Enprotect, Cambridge, MA, USA) i przechowywano w temperaturze 4°C. Zastosowano protokół z poprzednich badań z kapsułkowanym FMT. Każda kapsułka zawiera około 0,35 g liofilizowanego ekstraktu kału. Jako placebo stosuje się gorącą czekoladę w proszku O'boy.

30 uczestników przydzielono losowo i metodą podwójnie ślepej próby podzielono na dwie grupy, każda po 15 osób. Wszyscy uczestnicy otrzymają 5-dniowy (dzień 1-5, ryc. 1) kurs amoksycyliny + klawulanian 875/125 mg × 2.

Grupa A Grupa interwencyjna. Uczestnicy otrzymają 4 kapsułki zawierające odchody (kapsułka 1) po leczeniu antybiotykami w 7. dniu.

Grupa B Grupa kontrolna. Uczestnicy otrzymają 4 kapsułki placebo (kapsułka 2) po leczeniu antybiotykami w 7. dniu.

Grupa B otrzyma kapsułki FMT (kapsułki 1) w ramach „terapii ratunkowej” w 28. dniu. Grupa A otrzyma placebo (kapsułki 2), jak opisano wcześniej.

Kapsułki (kapsułki w punktach czasowych 1 i 2) podaje się pod nadzorem zespołu badawczego. Kapsułki połyka się, popijając sokiem. Uczestnicy proszeni są o przestrzeganie diety klarownie płynnej przez 8 godzin przed interwencją. W ciągu dwóch godzin od strawienia kapsułek nie należy przyjmować żadnego stałego pokarmu. W przeciwnym razie nie uważa się za konieczne żadnych ograniczeń diety. Podczas wizyty przeprowadza się z uczestnikami wywiad i sprawdza, czy nie wystąpiły objawy infekcji oraz czy nie nastąpiły istotne zmiany w funkcjonowaniu jelit.

Próbki kału będą pobierane od wszystkich uczestników co tydzień, począwszy od dnia 6 przez 7 tygodni do dnia 48 (w sumie 7 próbek (3 fiolki/próbkę)). Próbki do badań przechowuje się w pojemnikach na kał w domowej zamrażarce (-18°C) do czasu pobrania przez personel badawczy, a następnie przechowuje w tym miejscu w temperaturze -80°C. Próbki kalprotektyny przechowuje się w lodówce do czasu pobrania przez personel badawczy.

Uczestnicy będą wypełniać ankietę zawierającą pytania dotyczące wszelkich objawów brzusznych, częstotliwości wypróżnień, konsystencji stolca, bólu brzucha, nudności i innych przyjmowanych leków co tydzień do 7 tygodnia. Stosowanie dodatkowych antybiotyków w okresie obserwacji prowadzi do rezygnacji. Uczestnicy wypełniają ankietę dotyczącą jakości życia (HRQoL) w dniu 1 (wprowadzenie antybiotyków), w dniu 7, gdy przeprowadzana jest auto-FMT/placebo (pierwsza interwencja), w dniu 28 (druga interwencja) i na koniec kolejnej okres wzrostu (dzień 48) (http://www.15d-instrument.net/15d/).

Uczestnicy z gorączką, wodnistą biegunką (> 3 luźne stolce w ciągu 24 godzin), krwawymi stolcami, bólem brzucha i skurczami) są badani na obecność C. difficile. W przypadku gorączki kontroluje się poziom CRP i pełną morfologię krwi. Uczestnicy z krwawymi stolcami zostaną wykluczeni z badania.

Próbki krwi będą pobierane w dniach 7, 9, 28 i 30. Pobiera się 5 ml krwi (białko C-reaktywne, osocze).