Autoflor -Gevriesdroogde ingekapselde autologische FMT om het darmmicrobioom te herstellen na behandeling met antibiotica (FMT)

Het gebruik van antibiotica heeft ook nadelen op korte en lange termijn voor het individu. Uit onderzoeken bij volwassenen is gebleken dat orale inname van antibiotica een aanzienlijke invloed heeft op de darmmicrobiota, door de diversiteit te verminderen en de samenstelling te veranderen, en door de verspreiding van antibioticaresistentiegenen (AR).

Gevriesdroogde FMT-producten hebben een langdurige stabiliteit van de fecale microbiota die nuttig zijn voor inkapseling. De hoeveelheid capsules die nodig is om te verteren is ook veel lager vergeleken met het gebruik van vers of bevroren materiaal.

Anticiperend op een uitval van 25% zullen we 40 gezonde volwassenen tussen 18 en 40 jaar rekruteren. De ontstekingsstatus van de deelnemers bij rekrutering zal worden getest door middel van het nemen van bloedmonsters. Er wordt een monster van 100-150 g van de ontlasting van de deelnemers verkregen. De ontlasting wordt getest op mogelijke schadelijke ziekteverwekkers.

50 g verzamelde ontlasting wordt binnen 6 uur na passage verwerkt, verdund in 0,85% NaCl en gehomogeniseerd met behulp van een mixer. De fecale suspensie wordt gefilterd door gesteriliseerde metalen zeven onder een biologische veiligheidskast. De suspensie wordt vervolgens gecentrifugeerd. Het supernatant wordt vervolgens gedecanteerd in nieuwe centrifugebuizen en gecentrifugeerd. De bovenste bacteriepellet wordt geresuspendeerd in isotoon natriumchloride met 10% trehalose. De suspensie wordt maximaal twee weken bij -80°C bewaard voordat deze wordt gelyofiliseerd. De oplossing wordt gedurende 44 uur gelyofiliseerd in een Lyoquest plus Ae85C (Telstar, Tarrasa, Spanje) en het resulterende product wordt ingekapseld in hypromellose-capsules (maat 0, Capsugel Enprotect, Cambridge, MA, VS) en bewaard bij 4 ° C. Het protocol is toegepast uit eerdere onderzoeken met ingekapselde FMT. Elke capsule bevat ongeveer 0,35 g gelyofiliseerd ontlastingextract. O'boy warme chocolademelkpoeder wordt gebruikt als placebo.

De 30 deelnemers worden gerandomiseerd en dubbelblind in twee groepen verdeeld, elk met 15 proefpersonen. Alle deelnemers krijgen een 5-daagse (dag 1-5, figuur 1) kuur met Amoxicilline + Clavulanaat 875/125 mg × 2.

Groep A Interventiegroep. De deelnemers krijgen na behandeling met antibiotica op dag 7 4 capsules met ontlasting (Capsule 1).

Groep B Controlegroep. De deelnemers krijgen na behandeling met antibiotica op dag 7 4 placebocapsules (capsule 2).

Groep B krijgt op dag 28 FMT-capsules (capsules 1) als ‘reddingstherapie’. Groep A krijgt een placebo (capsules 2) zoals eerder beschreven.

De capsules (capsules op tijdstip 1 en 2) worden toegediend onder toezicht van het onderzoeksteam. De capsules worden doorgeslikt met sap. Deelnemers wordt gevraagd om gedurende 8 uur voorafgaand aan de interventie een helder vloeibaar dieet te volgen. Er mag geen vast voedsel worden ingenomen binnen twee uur na het verteren van de capsules. Voor het overige worden beperkingen aan het dieet niet noodzakelijk geacht. Tijdens het bezoek worden de deelnemers geïnterviewd en wordt gecontroleerd of er geen tekenen van infectie zijn opgetreden en of er geen significante veranderingen in de darmfunctie zijn opgetreden.

Fecale monsters worden wekelijks verzameld van alle deelnemers vanaf dag 6 gedurende 7 weken tot dag 48 (totaal 7 monsters (3 flesjes/monster)). De onderzoeksmonsters worden bewaard in opvangcontainers voor ontlasting in de vriezer thuis (-18°C) totdat ze door het onderzoekspersoneel worden verzameld en daarna bewaard bij -80°C. Calprotectinemonsters worden in de koelkast bewaard totdat ze door het onderzoekspersoneel worden verzameld.

De deelnemers vullen wekelijks tot 7 weken een vragenlijst in met vragen over eventuele buikklachten, defecatiefrequentie, consistentie van de ontlasting, buikpijn, misselijkheid en andere gebruikte medicatie. Gebruik van aanvullende antibiotica tijdens de follow-upperiode leidt tot uitval. Deelnemers vullen een onderzoek naar de kwaliteit van leven (GKvL) in op dag 1 (de introductie van antibiotica), op dag 7 wanneer auto-FMT/placebo (eerste interventie) wordt uitgevoerd, op dag 28 (tweede interventie) en aan het einde van de daaropvolgende interventie. -up-periode (dag 48) (http://www.15d-instrument.net/15d/).

Deelnemers met koorts, waterige diarree (> 3 dunne ontlasting in 24 uur), bloederige ontlasting, buikpijn en krampen) worden getest op C. difficile. In geval van koorts worden het CRP-niveau en het volledige bloedbeeld gecontroleerd. Deelnemers met bloederige ontlasting worden uitgesloten van het onderzoek.

Er worden bloedmonsters genomen op dag 7, 9, 28 en 30. Er wordt 5 ml bloed afgenomen (C-reactief proteïne, plasma).