CAPA-IVM-viljelmä alhaisella happipaineella

Kapasitaatio in vitro -kypsytys (CAPA-IVM) on äskettäin edennyt munasolujen viljelyssä germinaalvesikkelivaiheesta (GV). Tämä lähestymistapa on muunneltu versio tavanomaisesta koeputkihedelmöityksestä (IVF) ja intrasytoplasmisesta siittiöinjektiosta (ICSI), joka on seurausta miedosta stimulaatiosta tai kontrolloidusta munasarjojen stimulaatiosta. Erityisesti IVM-hoitoa voidaan käyttää potilaille, joilla on diagnosoitu munasarjojen monirakkulatauti (PCOS), suurempi määrä sekundaarisia follikkeleita (jotka ovat lähes 15 % potilaista), ja hoitaa useita potilaita, joilla on munasarjojen hyperstimulaation, laskimotromboembolian tai munasarjojen riski. vääntö. Lisäksi CAPA-IVM auttaa lyhentämään hoitoaikaa, on halvempaa ja parantaa potilaan käyttömukavuutta ilman useita seurantatutkimuksia. Elävä syntyvyys ensimmäisen alkionsiirron jälkeen CAPA-IVM-ryhmässä oli 35,2 %, mikä ei eronnut tilastollisesti merkitsevästi IVF-ryhmästä 43,2 %:lla (riskiero -8,1 %; 95 %:n luottamusväli -16,6 %:sta 0,5 %:iin ). Kuitenkin korkealaatuisten alkioiden määrä kussakin syklissä ja kumulatiivinen kliininen raskausaste CAPA-IVM:ssä olivat edelleen alhaisemmat kuin cIVF:ssä.

Lisäksi olisi harkittava lisätutkimuksia, koska samanaikaisista raporteista ei ole laadukasta näyttöä. Siksi oosyyttien kypsymisolosuhteiden parantaminen CAPA-IVM:ssä optimaalisen oosyyttimäärän ja mahdollisimman suuren alkionkehitysmahdollisuuden keräämiseksi on välttämätöntä. Monet eläin- ja ihmismalleilla tehdyt tutkimukset ovat osoittaneet, että CAPA-IVM:n tehokkuus riippuu useista tekijöistä. Näistä ympäristön viljelyolosuhteilla, kuten hapen (O2) pitoisuudella, on ratkaiseva rooli terveiden kypsien munasolujen tuottamisessa. O2 on tärkeä fyysinen ja kemiallinen osa munanjohtimessa, kohdussa ja munasarjojen follikkeleissa, ja se liittyy läheisesti aineenvaihduntaan, munasolujen kypsymiseen ja varhaiseen alkionkehitykseen. Viimeaikaiset tutkimukset viittaavat siihen, että O2-pitoisuus voi merkittävästi säädellä munasolujen kypsymistä ja varhaista alkion kehitystä hypoksian aiheuttavan tekijän (HIF) avulla. IVM-viljelyympäristön O2-pitoisuusindeksistä ei ole päästy yksimielisyyteen. Munasoluihin upotettuja viljelyjärjestelmiä on yleisesti käytetty kahdessa O2-pitoisuudessa, 5 % ja 20 % maailmanlaajuisesti. Ihmiskehossa cumulus-oosyyttikompleksit (COC) kypsyvät olosuhteissa, joissa O2-pitoisuudet vaihtelevat 2–9 %.

Sitä vastoin COC:t altistetaan ilmakehän O2-pitoisuudelle 20 % IVM-käsittelyn ja viljelyn aikana. Vaikka 5 %:n pitoisuus jäljittelee sopivinta ympäristöä munanjohtimessa ja kohdussa, 20 % O2:ta käytetään laajalti IVM-tekniikoissa. Korkeiden pitoisuuksien käyttö helpottaa erilaistumisprosessien parempaa etenemistä ja lisää munasolujen kypsymisnopeutta. Jotkut viitekehykset kuitenkin osoittivat, että 20-prosenttinen O2 voi aiheuttaa reaktiivisen oksidatiivisen stressin (ROS) riskin, mikä johtaa epätasapainoon prooksidanttien ja antioksidanttien suhteen, mikä johtaa soluvaurioihin. Lisäksi 5 % 02:ssa viljeltyjen munasolujen reaaliaikainen hengitysanalyysi on samanlainen kuin in vivo -kehittyneiden munasolujen, mutta indusoi soluaktiivisuutta ja hapenkulutusta 20 % 02:ssa. Ilmakehän O2-pitoisuuden (20 %) ja alhaisen O2-konsentraation (5 %) vaikutus CAPA-IVM-viljelyn aikana hiirillä, joka osoitti Vrije Universiteit Brusselin (VUB) - Belgian -tutkimuksessa, että 5 % 02:lla viljeltyjen COC:iden hengityskyky oli suhteellisen samanlainen kuin COC:t, jotka kehittyvät ja kypsyvät in vivo.

Siitä huolimatta 20 % O2:ssa viljellyt COC:t lisäsivät hengitystoimintaa ja hapenkulutusta huomattavasti. Tutkimuksessa havaittiin, että yhdistelmäehkäisytablettien viljely ennen IVM:tä 20 % O2:lla aiheutti kehityshäiriöitä. Tulos oli myös epäsuotuisa, jos hiiren COC-soluja viljeltiin IVM-vaiheessa 5 % 02:lla. Näiden analyysien perusteella tutkijat olettivat, että 5 % O2 oli optimaalinen viljelyolosuhde esi-IVM-vaiheelle, kun taas 20 % O2 oli merkityksellisempi IVM-viljelyvaiheessa. Yhdistämällä nämä havainnot VUB:n tuloksiin ja CAPA-IVM-oosyyttien erilaistumisprosessin ominaisuuksiin, tämä tutkimus on jaettu kahteen pääryhmään, mukaan lukien 5 % pre-IVM ja 20 % IVM vs. 20 % pre-IVM ja IVM) ja osoittaa, onko Tätä hypoteesia tulisi soveltaa CAPA-IVM:ään ihmisillä. CAPA-IVM-viljelyjärjestelmän tehostaminen parantaa tämän tekniikan hoidon tehokkuutta ja tarjoaa erilaisia ​​etuja potilaille, jotka saavat avusteista lisääntymistekniikkaa.

Tutkimusmenettely:

Kelpoisuuden ja satunnaistamisen seulonta

• Tämä tutkimus suoritetaan My Duc Hospitalissa, Ho Chi Minh Cityssä, Vietnamissa.
• Naisille, jotka ovat mahdollisesti kelvollisia, tiedotetaan tutkimuksesta IVM-hoitoaiheen aikaan.
• Kelpoisuusseulonta suoritetaan ensimmäisen käynnin päivänä, jolloin IVM-hoito on aiheellinen.
• Potilaille toimitetaan tutkimukseen liittyvät tiedot sekä tietoon perustuvat suostumusasiakirjat. Tutkijat hankkivat kaikilta naisilta allekirjoitetut tietoisen suostumuksen lomakkeet ennen ilmoittautumista.

Oosyytit jaetaan kahteen ryhmään:

Ryhmä 1 (sisältää 2 alaryhmää: 1A ja 1B): Ilman happipitoisuus CAPA-IVM-viljelmä T = munasolujen kokonaismäärä OR:n jälkeen ja alaryhmiä on kaksi.

Munasolujen määrä on jaettu seuraavasti:

Jos T on parillinen luku:

• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 1A: Yksi munasolu.
• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 1B: T1B = (T-2)/2.

Jos T on pariton luku:

• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 1A: Yksi munasolu.
• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. Ensimmäisen potilaan yksi jäljellä oleva munasolu määrätään ryhmään 1B ja loput seuraavasta potilaasta ryhmään 2B. Jatketaan näin peräkkäin seuraavan loppuosan ajan.

Ryhmä 2 (sisältää 2 alaryhmää: 2A ja 2B): Matala happipitoisuus CAPA-IVM-viljelmä T = Oosyyttien kokonaismäärä OR:n jälkeen ja alaryhmiä on kaksi.

Munasolujen määrä on jaettu seuraavasti:

Jos T on parillinen luku:

• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 2A: Yksi munasolu.
• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 2B: T2B = (T-2)/2.

Jos T on pariton luku:

• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 2A: Yksi munasolu.
• Munasolujen lukumäärä ryhmässä 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. Ensimmäisen potilaan yksi jäljellä oleva munasolu määrätään ryhmään 1B ja loput seuraavasta potilaasta ryhmään 2B. Jatketaan näin peräkkäin seuraavan loppuosan ajan.

Ryhmät 1A, 2A: Keräys kapasitaation jälkeen: munasolut ja cumulussolut.

Ryhmä 1B, 2B: Keräys kapasitoinnin jälkeen: käytetty väliaine, tyhjä kuoppa. Keräys kypsytyksen jälkeen: käytetty elatusaine, cumulussolu, tyhjä kuoppa.