CAPA-IVM-kultur med låg syrespänning

Kapacitationsmognad in vitro (CAPA-IVM) har nyligen utvecklats för att odla oocyter från groddblåsan (GV). Detta tillvägagångssätt är en modifierad version av konventionell in vitro-fertilisering (IVF) och intracytoplasmatisk spermieinjektion (ICSI), efter mild stimulering eller ingen kontrollerad ovariestimulering. Specifikt kan IVM indiceras för patienter som diagnostiserats med polycystiskt ovariesyndrom (PCOS), ett högre antal sekundära folliklar (som utgör nästan 15 % av det totala antalet patienter), och behandla en rad patienter med risk för ovariell hyperstimulering, venös tromboembolism eller ovarie torsion. Dessutom hjälper CAPA-IVM till att förkorta behandlingstiden, är billigare och förbättrar patientens bekvämlighet utan flera uppföljningsundersökningar. Antalet levande födslar efter den första embryoöverföringen i CAPA-IVM-gruppen var 35,2 %, vilket inte skilde sig statistiskt signifikant från IVF-gruppen vid 43,2 % (riskskillnad -8,1 %; 95 % konfidensintervall från -16,6 % till 0,5 % ). Antalet embryon av hög kvalitet i varje cykel och den kumulativa kliniska graviditetsfrekvensen i CAPA-IVM var dock fortfarande lägre än i cIVF.

Dessutom bör ytterligare utredning övervägas på grund av bristen på högkvalitativa bevis för samtidiga rapporter. Därför är det viktigt att förbättra oocytmognadsförhållandena i CAPA-IVM för att skörda det optimala antalet oocyter och den högsta möjligheten för embryonutveckling. Många studier utförda på både djur- och humanmodeller har visat att effektiviteten av CAPA-IVM beror på olika faktorer. Bland dessa spelar de miljömässiga odlingsförhållandena såsom syrekoncentration (O2) en avgörande roll för att producera friska mogna oocyter. O2 är en viktig fysisk och kemisk komponent i äggledaren, livmodern och äggstocksfollikeln, den är nära relaterad till metabolisk aktivitet, oocytmognad och tidig embryonutveckling. Ny forskning antydde att O2-koncentrationen avsevärt kan reglera oocytmognad och tidig embryonutveckling genom hypoxiinducerbar faktor (HIF). En konsensus om O2-koncentrationsindex i IVM-odlingsmiljön har inte uppnåtts. Oocytinbäddade odlingssystem har vanligen använts i två O2-koncentrationer, 5 % och 20 % över hela världen. I människokroppen mognar cumulus-oocytkomplex (COC) under förhållanden med låga O2-koncentrationer från 2 % till 9 %.

Omvänt exponeras COC för en atmosfärisk O2-koncentration på 20% under IVM-manipulation och -odling. Även om koncentrationen på 5% efterliknar den mest lämpliga miljön i äggledaren och livmodern, används 20% O2 i stor utsträckning i IVM-tekniker. Användningen av höga koncentrationer underlättar en bättre progression av differentieringsprocesser och ökar oocyternas mognadshastighet. Vissa referensramar indikerade dock att 20 % O2 kan utgöra en risk för reaktiv oxidativ stress (ROS), vilket leder till en obalans i förhållandet mellan prooxidanter och antioxidanter, vilket resulterar i cellskador. Dessutom liknar realtidsrespirationsanalys av oocyter odlade med 5 % O2 in vivo-utvecklade oocyter men inducerade cellulär aktivitet och syreförbrukning vid 20 % O2. Effekten av atmosfärisk O2-koncentration (20 %) och låg O2-koncentration (5 %) under CAPA-IVM-odling i möss visade i studien av Vrije Universiteit Brussel (VUB) - Belgien att andningsförmågan hos p-piller odlade med 5 % O2 var relativt lik COCs som utvecklas och mognar in vivo.

Icke desto mindre ökade COCs odlade med 20 % O2 andningsaktivitet och syreförbrukning anmärkningsvärt. Studien observerade att pre-IVM-odling av COC vid 20 % O2 orsakade utvecklingsstörningar. Resultatet var också ogynnsamt om p-piller från mus odlades vid IVM-steget med 5% O2. Baserat på dessa analyser antog forskarna att en 5% O2 var det optimala odlingsförhållandet för pre-IVM-steget, medan en 20% O2 var mer relevant för IVM-odlingssteget. Genom att kombinera dessa fynd med resultat från VUB och egenskaperna hos differentieringsprocessen i CAPA-IVM oocyter, är denna studie uppdelad i två huvudgrupper, inklusive 5 % pre-IVM och 20 % IVM mot 20 % pre-IVM och IVM) och visar huruvida denna hypotes bör tillämpas CAPA-IVM på människa. Förbättringen av CAPA-IVM-odlingssystemet leder till förbättrad behandlingseffektivitet av denna teknik och ger olika fördelar för patienter som genomgår assisterad reproduktionsteknologi.

Studieförfarande:

Screening för behörighet och randomisering

• Denna prövning kommer att genomföras på My Duc Hospital, Ho Chi Minh City, Vietnam.
• Kvinnor som är potentiellt kvalificerade kommer att få information om prövningen vid tidpunkten för IVM-behandlingsindikation.
• Screening för behörighet kommer att utföras på dagen för det första besöket när IVM-behandlingen är indicerad.
• Patienterna kommer att få information relaterad till studien tillsammans med de informerade samtyckesdokumenten. Undertecknade formulär för informerat samtycke kommer att erhållas av utredarna från alla kvinnor före registreringen.

Oocyter kommer att delas in i 2 grupper:

Grupp 1 (inkluderar 2 undergrupper: 1A och 1B): Luftsyrekoncentration CAPA-IVM-odling T = Totalt antal oocyter efter OR och det finns två undergrupper.

Antalet oocyter är uppdelat nedan:

Om T är ett jämnt tal:

• Antal oocyter i grupp 1A: En oocyt.
• Antal oocyter i grupp 1B: T1B = (T-2)/2.

Om T är ett udda tal:

• Antal oocyter i grupp 1A: En oocyt.
• Antal oocyter i grupp 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. En oocytrest av den första patienten kommer att tilldelas grupp 1B, och resten av nästa patient kommer att tilldelas grupp 2B. Fortsätter att göra det sekventiellt under nästa återstod.

Grupp 2 (inkluderar 2 undergrupper: 2A och 2B): Låg syrekoncentration CAPA-IVM-odling T = Totalt antal oocyter efter OR och det finns två undergrupper.

Antalet oocyter är uppdelat nedan:

Om T är ett jämnt tal:

• Antal oocyter i grupp 2A: En oocyt.
• Antal oocyter i grupp 2B: T2B = (T-2)/2.

Om T är ett udda tal:

• Antal oocyter i grupp 2A: En oocyt.
• Antal oocyter i grupp 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. En oocytrest av den första patienten kommer att tilldelas grupp 1B, och resten av nästa patient kommer att tilldelas grupp 2B. Fortsätter att göra det sekventiellt under nästa återstod.

Grupp 1A, 2A: Samling efter kapacitering: oocyt och cumuluscell.

Grupp 1B, 2B: Insamling efter kapacitering: förbrukade media, blank brunn. Samling efter mognad: förbrukat medium, cumuluscell, blank brunn.