Культура CAPA-IVM с низким напряжением кислорода

Капацитационное созревание in vitro (CAPA-IVM) недавно было усовершенствовано при культивировании ооцитов со стадии зародышевого пузырька (GV). Этот подход представляет собой модифицированную версию традиционного экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и интрацитоплазматической инъекции спермы (ИКСИ) после легкой стимуляции или без контролируемой стимуляции яичников. В частности, IVM может быть показана пациенткам с диагнозом синдром поликистозных яичников (СПКЯ), большим количеством вторичных фолликулов (составляющим почти 15% от общего числа пациентов), а также для лечения ряда пациентов с риском гиперстимуляции яичников, венозной тромбоэмболии или яичниковой тромбоэмболии. кручение. Кроме того, CAPA-IVM помогает сократить время лечения, является менее дорогостоящим и повышает удобство для пациентов без повторных повторных обследований. Частота живорождения после первого переноса эмбрионов в группе CAPA-IVM составила 35,2%, что статистически значимо не отличалось от группы ЭКО - 43,2% (разница рисков -8,1%; 95% доверительный интервал от -16,6% до 0,5%). ). Однако количество высококачественных эмбрионов в каждом цикле и кумулятивная частота клинической беременности в CAPA-IVM были все еще ниже, чем в cIVF.

Более того, следует рассмотреть возможность дальнейшего расследования из-за отсутствия высококачественных доказательств параллельных сообщений. Поэтому улучшение условий созревания ооцитов в CAPA-IVM для сбора оптимального количества ооцитов и максимальной возможности развития эмбриона имеет важное значение. Многие исследования, проведенные как на животных, так и на людях, показали, что эффективность CAPA-IVM зависит от различных факторов. Среди них условия окружающей среды культивирования, такие как концентрация кислорода (O2), играют решающую роль в производстве здоровых зрелых ооцитов. O2 является жизненно важным физическим и химическим компонентом фаллопиевой трубы, матки и фолликула яичника. Он тесно связан с метаболической активностью, созреванием ооцитов и ранним развитием эмбриона. Недавние исследования показали, что концентрация O2 может существенно регулировать созревание ооцитов и раннее развитие эмбриона посредством фактора, индуцируемого гипоксией (HIF). Консенсус по показателю концентрации О2 в культуральной среде ИВМ не был достигнут. Во всем мире широко используются системы культивирования, встроенные в ооциты, с двумя концентрациями O2: 5% и 20%. В организме человека кумулюсно-ооцитарные комплексы (КОК) созревают в условиях с низкими концентрациями О2 в пределах от 2% до 9%.

И наоборот, КОК подвергаются воздействию атмосферной концентрации O2 20% во время манипуляций и культивирования IVM. Хотя концентрация 5% имитирует наиболее подходящую среду в маточной трубе и матке, 20% O2 широко применяется в методах IVM. Применение высоких концентраций способствует лучшему протеканию процессов дифференцировки и увеличивает скорость созревания ооцитов. Однако некоторые справочные данные указывают на то, что 20% O2 может представлять риск реактивного окислительного стресса (АФК), что приводит к дисбалансу в соотношении прооксидантов и антиоксидантов, что приводит к повреждению клеток. Кроме того, анализ дыхания в реальном времени ооцитов, культивируемых при 5% O2, аналогичен анализу ооцитов, полученных in vivo, но индуцирует клеточную активность и потребление кислорода при 20% O2. Влияние концентрации O2 в атмосфере (20%) и низкой концентрации O2 (5%) во время культивирования CAPA-IVM на мышах показано в исследовании Брюссельского университета Vrije (VUB) - Бельгия, что дыхательная способность КОК, культивированных при 5% O2, была относительно похоже на КОК, развивающиеся и созревающие in vivo.

Тем не менее, КОК, культивированные при 20% O2, значительно повышали дыхательную активность и потребление кислорода. Исследование показало, что культура КОК перед IVM с 20% O2 вызывала нарушения развития. Кроме того, результат был неблагоприятным, если мышиные КОК культивировали на этапе IVM с 5% O2. Основываясь на этом анализе, исследователи предположили, что 5% O2 было оптимальным условием культивирования для этапа перед IVM, тогда как 20% O2 было более актуальным для этапа культивирования IVM. Объединив эти результаты с результатами VUB и характеристиками процесса дифференцировки в ооцитах CAPA-IVM, это исследование разделено на две основные группы, включая 5% до IVM и 20% IVM по сравнению с 20% до IVM и IVM) и демонстрирует, эту гипотезу следует применить CAPA-IVM на человеке. Совершенствование системы культуры CAPA-IVM приводит к повышению эффективности лечения с помощью этого метода и дает различные преимущества пациентам, проходящим вспомогательные репродуктивные технологии.

Процедура исследования:

Скрининг на соответствие требованиям и рандомизация

• Это исследование будет проводиться в больнице My Duc, Хошимин, Вьетнам.
• Женщинам, которые потенциально соответствуют критериям участия, будет предоставлена ​​информация об исследовании во время назначения лечения IVM.
• Проверка приемлемости будет проводиться в день первого визита, когда показано лечение IVM.
• Пациентам будет предоставлена ​​информация, относящаяся к исследованию, вместе с документами об информированном согласии. Подписанные формы информированного согласия будут получены исследователями от всех женщин до включения в исследование.

Ооциты будут разделены на 2 группы:

Группа 1 (включает 2 подгруппы: 1А ​​и 1Б): Концентрация кислорода в воздухе Культура CAPA-IVM T = Общее количество ооцитов после ОР, имеется две подгруппы.

Число ооцитов делится ниже:

Если Т — четное число:

• Количество ооцитов в группе 1А: Один ооцит.
• Количество ооцитов в группе 1Б: Т1В = (Т-2)/2.

Если T — нечетное число:

• Количество ооцитов в группе 1А: Один ооцит.
• Количество ооцитов в группе 1Б: Т1В = ([Т-1]-2)/2. Один остаток ооцитов первого пациента будет отнесен к группе 1B, а остаток следующего пациента будет отнесен к группе 2B. Продолжаем делать это последовательно для следующего остатка.

Группа 2 (включает 2 подгруппы: 2А и 2Б): Культура CAPA-IVM с низкой концентрацией кислорода T = Общее количество ооцитов после ОР, имеются две подгруппы.

Число ооцитов делится ниже:

Если Т — четное число:

• Количество ооцитов в группе 2А: Один ооцит.
• Количество ооцитов в группе 2Б: Т2В = (Т-2)/2.

Если T — нечетное число:

• Количество ооцитов в группе 2А: Один ооцит.
• Количество ооцитов в группе 2Б: Т2В = ([Т-1]-2)/2. Один остаток ооцитов первого пациента будет отнесен к группе 1B, а остаток следующего пациента будет отнесен к группе 2B. Продолжаем делать это последовательно для следующего остатка.

Группа 1А, 2А: Сбор после капацитации: ооцит и кумулюсная клетка.

Группа 1B, 2B: Сбор после капацитации: отработанная среда, пустая лунка. Сбор после созревания: отработанная среда, кумулюсные клетки, пустая лунка.