CAPA-IVM-kultur med lav iltspænding

Kapacitations in vitro modning (CAPA-IVM) er for nylig blevet fremskreden i dyrkning af oocytter fra germinal vesikel (GV) stadium. Denne tilgang er en modificeret version af konventionel in vitro fertilisering (IVF) og intracytoplasmatisk sæd-injektion (ICSI), efter mild stimulation eller ingen kontrolleret ovariestimulering. Specifikt kan IVM indiceres til patienter diagnosticeret med polycystisk ovariesyndrom (PCOS), et højere antal sekundære follikler (som udgør næsten 15 % af det samlede antal patienter) og behandle en række patienter med risiko for ovariehyperstimulering, venøs tromboemboli eller ovarie torsion. Derudover hjælper CAPA-IVM med at forkorte behandlingstiden, er billigere og opgraderer patientens bekvemmelighed uden flere opfølgende undersøgelser. Levende fødselsraten efter den første embryooverførsel i CAPA-IVM-gruppen var 35,2 %, hvilket ikke var statistisk signifikant forskellig fra IVF-gruppen på 43,2 % (risikoforskel -8,1 %; 95 % konfidensinterval fra -16,6 % til 0,5 % ). Imidlertid var antallet af højkvalitetsembryoner i hver cyklus og den kumulative kliniske graviditetsrate i CAPA-IVM stadig lavere end i cIVF.

Ydermere bør yderligere undersøgelse overvejes på grund af manglen på beviser af høj kvalitet for samtidige rapporter. Derfor er det vigtigt at forbedre oocytmodningsbetingelserne i CAPA-IVM for at høste det optimale antal oocytter og den højeste mulighed for embryoudvikling. Mange undersøgelser udført på både dyre- og menneskemodeller har vist, at effektiviteten af ​​CAPA-IVM afhænger af forskellige faktorer. Blandt disse spiller de miljømæssige dyrkningsbetingelser, såsom oxygenkoncentration (O2) en afgørende rolle i fremstillingen af ​​sunde modne oocytter. O2 er en vital fysisk og kemisk komponent i æggelederen, livmoderen og æggestokkens follikel, det er tæt forbundet med metabolisk aktivitet, oocytmodning og tidlig embryoudvikling. Nyere forskning antydede, at O2-koncentration signifikant kan regulere oocytmodning og tidlig embryoudvikling gennem hypoxi-inducerbar faktor (HIF). Der er ikke opnået konsensus om O2-koncentrationsindekset i IVM-kulturmiljøet. Oocytindlejrede kultursystemer er almindeligt anvendt i to O2-koncentrationer, 5% og 20% ​​på verdensplan. I den menneskelige krop modnes cumulus-oocytkomplekser (COC'er) under forhold med lave O2-koncentrationer fra 2 % til 9 %.

Omvendt udsættes COC'er for en atmosfærisk O2-koncentration på 20% under IVM-manipulation og kultur. Selvom koncentrationen på 5% efterligner det mest korrekte miljø i æggelederen og livmoderen, anvendes 20% O2 i vid udstrækning i IVM-teknikker. Brugen af ​​høje koncentrationer letter en bedre progression af differentieringsprocesser og øger oocytternes modningshastighed. Nogle referencerammer indikerede dog, at en 20% O2 kan udgøre en risiko for reaktivt oxidativt stress (ROS), hvilket fører til en ubalance i forholdet mellem pro-oxidanter og antioxidanter, hvilket resulterer i cellulær skade. Desuden svarer realtidsrespirationsanalyse af oocytter dyrket ved 5 % O2 til in vivo-udviklede oocytter, men inducerede cellulær aktivitet og iltforbrug ved 20 % O2. Virkningen af ​​atmosfærisk O2-koncentration (20%) og lav O2-koncentration (5%) under CAPA-IVM-dyrkning i mus viste i undersøgelsen fra Vrije Universiteit Brussel (VUB) - Belgien, at den respiratoriske evne af COC'er dyrket ved 5% O2 var relativt ligner COC'er, der udvikles og modnes in vivo.

Ikke desto mindre øgede COC'er dyrket ved 20% O2 åndedrætsaktivitet og iltforbrug bemærkelsesværdigt. Undersøgelsen observerede, at præ-IVM dyrkning af COC'er ved 20% O2 forårsagede udviklingsforstyrrelser. Resultatet var også ugunstigt, hvis COC'er fra mus blev dyrket på IVM-trinnet med 5% O2. Baseret på disse analyser antog forskerne, at en 5% O2 var den optimale dyrkningsbetingelse for præ-IVM-trinnet, mens en 20% O2 var mere relevant for IVM-dyrkningstrinnet. Ved at kombinere disse resultater med resultater fra VUB og karakteristika ved differentieringsprocessen i CAPA-IVM oocytter, er denne undersøgelse opdelt i to hovedgrupper, herunder 5 % præ-IVM og 20 % IVM versus 20 % præ-IVM og IVM) og viser, om denne hypotese bør anvendes CAPA-IVM på mennesker. Forbedringen af ​​CAPA-IVM kultursystemet fører til forbedret behandlingseffektivitet af denne teknik og giver forskellige fordele for patienter, der gennemgår assisteret reproduktionsteknologi.

Studieprocedure:

Screening for berettigelse og randomisering

• Dette forsøg vil blive udført på My Duc Hospital, Ho Chi Minh City, Vietnam.
• Kvinder, der er potentielt kvalificerede, vil blive informeret om forsøget på tidspunktet for IVM-behandlingsindikation.
• Screening for egnethed vil blive udført på dagen for det første besøg, når IVM-behandlingen er indiceret.
• Patienterne vil blive udleveret information relateret til undersøgelsen sammen med de informerede samtykkedokumenter. Underskrevne informerede samtykkeformularer vil blive indhentet af efterforskerne fra alle kvinder før tilmeldingen.

Oocytter opdeles i 2 grupper:

Gruppe 1 (inkluderer 2 undergrupper: 1A og 1B): Luftiltkoncentration CAPA-IVM kultur T = Samlet antal oocytter efter OR, og der er to undergrupper.

Antallet af oocytter er opdelt nedenfor:

Hvis T er et lige tal:

• Antal oocytter i gruppe 1A: En oocyt.
• Antal oocytter i gruppe 1B: T1B = (T-2)/2.

Hvis T er et ulige tal:

• Antal oocytter i gruppe 1A: En oocyt.
• Antal oocytter i gruppe 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. En oocytrest af den første patient vil blive tildelt gruppe 1B, og resten af ​​den næste patient vil blive tildelt gruppe 2B. Fortsætter med at gøre det sekventielt for den næste resterende del.

Gruppe 2 (inkluderer 2 undergrupper: 2A og 2B): Lav iltkoncentration CAPA-IVM kultur T = Samlet antal oocytter efter OR, og der er to undergrupper.

Antallet af oocytter er opdelt nedenfor:

Hvis T er et lige tal:

• Antal oocytter i gruppe 2A: En oocyt.
• Antal oocytter i gruppe 2B: T2B = (T-2)/2.

Hvis T er et ulige tal:

• Antal oocytter i gruppe 2A: En oocyt.
• Antal oocytter i gruppe 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. En oocytrest af den første patient vil blive tildelt gruppe 1B, og resten af ​​den næste patient vil blive tildelt gruppe 2B. Fortsætter med at gøre det sekventielt for den næste resterende del.

Gruppe 1A, 2A: Samling efter kapacitering: oocyt og cumuluscelle.

Gruppe 1B, 2B: Indsamling efter kapacitering: brugte medier, blank brønd. Opsamling efter modning: brugte medier, cumuluscelle, blank brønd.