CAPA-IVM kultúra alacsony oxigénfeszültséggel

A kapacitációs in vitro érés (CAPA-IVM) a közelmúltban fejlődött a csíravezikula (GV) szakaszból származó petesejtek tenyésztésében. Ez a megközelítés a hagyományos in vitro megtermékenyítés (IVF) és az intracitoplazmatikus spermiuminjekció (ICSI) módosított változata, enyhe stimulációt követően, vagy nem történt kontrollált petefészek-stimuláció. Konkrétan az IVM olyan betegek számára javasolt, akiknél policisztás petefészek szindrómát (PCOS), több másodlagos tüszőt diagnosztizáltak (amely az összes beteg közel 15%-át teszi ki), és számos olyan beteg kezelésére alkalmazható, akiknél fennáll a petefészek hiperstimulációja, vénás thromboembolia vagy petefészek. csavarodás. Ezenkívül a CAPA-IVM segít lerövidíteni a kezelési időt, olcsóbb, és több utóvizsgálat nélkül is javítja a betegek kényelmét. Az élveszületési arány az első embriótranszfer után a CAPA-IVM csoportban 35,2% volt, ami statisztikailag nem különbözött szignifikánsan az IVF csoporttól, 43,2% (kockázati különbség -8,1%; 95% konfidencia intervallum -16,6% és 0,5% között) ). Azonban a jó minőségű embriók száma az egyes ciklusokban és a kumulatív klinikai terhességi arány a CAPA-IVM-ben még mindig alacsonyabb volt, mint a cIVF-ben.

Ezen túlmenően további vizsgálatot kell fontolóra venni az egyidejű jelentésekre vonatkozó jó minőségű bizonyítékok hiánya miatt. Ezért elengedhetetlen a petesejtek érési feltételeinek javítása a CAPA-IVM-ben az optimális petesejtek számának begyűjtése és az embriófejlődés lehető legnagyobb lehetősége érdekében. Számos állat- és emberi modellen végzett tanulmány kimutatta, hogy a CAPA-IVM hatékonysága számos tényezőtől függ. Ezek közül a környezeti tenyésztési feltételek, például az oxigén (O2) koncentrációja döntő szerepet játszanak az egészséges érett petesejtek előállításában. Az O2 a petevezeték, a méh és a petefészek tüszőjének létfontosságú fizikai és kémiai összetevője, szorosan összefügg a metabolikus aktivitással, a petesejtek érésével és a korai embriófejlődéssel. A legújabb kutatások arra utaltak, hogy az O2-koncentráció jelentősen szabályozhatja a petesejtek érését és a korai embriófejlődést a hipoxia-indukálható faktor (HIF) révén. Nem sikerült konszenzusra jutni az IVM tenyésztési környezetben az O2-koncentráció indexével kapcsolatban. A petesejtbe ágyazott tenyésztési rendszereket két O2-koncentrációban, 5%-ban és 20%-ban használják világszerte. Az emberi szervezetben a kumulusz-petesejtek komplexei (COC) érnek olyan körülmények között, ahol az O2-koncentráció alacsony, 2% és 9% között mozog.

Ezzel szemben a COC-k 20%-os légköri O2-koncentrációnak vannak kitéve az IVM manipuláció és tenyésztés során. Bár az 5%-os koncentráció utánozza a legmegfelelőbb környezetet a petevezetékben és a méhben, a 20%-os O2-t széles körben alkalmazzák az IVM technikákban. A magas koncentrációk alkalmazása elősegíti a differenciálódási folyamatok jobb előrehaladását és növeli a petesejtek érési sebességét. Egyes referenciakeretek azonban azt mutatták, hogy a 20%-os O2 kockázatot jelenthet a reaktív oxidatív stressz (ROS) kialakulására, ami a prooxidánsok és az antioxidánsok arányának felborulásához vezet, ami sejtkárosodáshoz vezet. Továbbá, az 5% O2 mellett tenyésztett petesejtek valós idejű légzésanalízise hasonló az in vivo kifejlődött petesejtekéhez, de sejtaktivitást és oxigénfogyasztást indukált 20% O2 mellett. A légköri O2-koncentráció (20%) és az alacsony O2-koncentráció (5%) hatása a CAPA-IVM egerekben végzett tenyésztése során a Vrije Universiteit Brussel (VUB) - Belgium - vizsgálata szerint az 5%-os O2-tartalom mellett tenyésztett COC-k légzési képessége viszonylag hasonló az in vivo fejlődő és érő COC-okhoz.

Mindazonáltal a 20%-os O2 mellett tenyésztett COC-k jelentősen növelték a légzési aktivitást és az oxigénfogyasztást. A tanulmány megállapította, hogy a COC-k IVM előtti tenyésztése 20%-os O2 mellett fejlődési zavarokat okozott. Szintén kedvezőtlen volt az eredmény, ha egér COC-okat tenyésztettünk az IVM lépésben 5% O2-vel. Ezen elemzések alapján a kutatók azt feltételezték, hogy az 5%-os O2 volt az optimális tenyésztési körülmény az IVM előtti lépéshez, míg a 20%-os O2 relevánsabb az IVM tenyésztési lépéshez. Ezeket az eredményeket a VUB eredményeivel és a CAPA-IVM petesejtek differenciálódási folyamatának jellemzőivel kombinálva ez a tanulmány két fő csoportra oszlik, beleértve az 5% pre-IVM és 20% IVM versus 20% pre-IVM és IVM), és bemutatja, hogy Ezt a hipotézist a CAPA-IVM-et emberben kell alkalmazni. A CAPA-IVM tenyésztési rendszer továbbfejlesztése ennek a technikának a kezelési hatékonyságának javulásához vezet, és különféle előnyöket biztosít az asszisztált reprodukciós technológián átesett betegek számára.

A vizsgálat menete:

Alkalmassági és randomizálási szűrés

• Ezt a vizsgálatot a vietnami Ho Si Minh-városban található My Duc kórházban fogják lefolytatni.
• A potenciálisan alkalmas nők tájékoztatást kapnak a vizsgálatról az IVM-kezelés indikációjának időpontjában.
• A jogosultság szűrésére az első vizit napján kerül sor, amikor az IVM kezelés javallt.
• A betegek tájékoztatást kapnak a vizsgálattal kapcsolatban a beleegyező dokumentumokkal együtt. A nyomozók a beiratkozás előtt minden nőtől beszerzik az aláírt, beleegyező nyilatkozatot.

A petesejteket 2 csoportra osztják:

1. csoport (2 alcsoportot tartalmaz: 1A és 1B): Levegő Oxigén Koncentráció CAPA-IVM tenyészet T = A petesejtek teljes száma az OR után, és két alcsoport van.

Az oociták száma az alábbiak szerint oszlik meg:

Ha T páros szám:

• Petesejtek száma az 1A csoportban: egy petesejtek.
• Petesejtek száma az 1B csoportban: T1B = (T-2)/2.

Ha T páratlan szám:

• Petesejtek száma az 1A csoportban: egy petesejtek.
• Petesejtek száma az 1B csoportban: T1B = ([T-1]-2)/2. Az első beteg egy petesejtek maradéka az 1B csoportba, a következő páciens maradéka pedig a 2B csoportba kerül besorolásra. Folytatva ezt szekvenciálisan a következő fennmaradó részhez.

2. csoport (2 alcsoportot foglal magában: 2A és 2B): Alacsony oxigénkoncentrációjú CAPA-IVM tenyészet T = A petesejtek teljes száma az OR után, és két alcsoport van.

Az oociták száma az alábbiak szerint oszlik meg:

Ha T páros szám:

• Petesejtek száma a 2A csoportban: egy petesejtek.
• Petesejtek száma a 2B csoportban: T2B = (T-2)/2.

Ha T páratlan szám:

• Petesejtek száma a 2A csoportban: egy petesejtek.
• Petesejtek száma a 2B csoportban: T2B = ([T-1]-2)/2. Az első beteg egy petesejtek maradéka az 1B csoportba, a következő páciens maradéka pedig a 2B csoportba kerül besorolásra. Folytatva ezt szekvenciálisan a következő fennmaradó részhez.

1A, 2A csoport: Gyűjtés kapacitáció után: oocita és kumulusz sejt.

1B, 2B csoport: Gyűjtés kapacitáció után: elhasznált hordozó, üres lyuk. Érlelés utáni begyűjtés: kimerült táptalaj, kumulusz sejt, vaküreg.