CAPA-IVM-cultuur met lage zuurstofspanning

Capacitatie in vitro rijping (CAPA-IVM) is onlangs gevorderd bij het kweken van eicellen uit het stadium van het kiemblaasje (GV). Deze aanpak is een aangepaste versie van conventionele in-vitrofertilisatie (IVF) en intracytoplasmatische sperma-injectie (ICSI), waarbij milde stimulatie of geen gecontroleerde ovariële stimulatie plaatsvond. Concreet kan IVM geïndiceerd zijn voor patiënten met de diagnose polycysteus ovariumsyndroom (PCOS), een groter aantal secundaire follikels (die bijna 15% van het totale aantal patiënten uitmaken), en voor de behandeling van een reeks patiënten met het risico op ovariële hyperstimulatie, veneuze trombo-embolie of ovariële hyperstimulatie. torsie. Bovendien helpt CAPA-IVM de behandeltijd te verkorten, is het goedkoper en verhoogt het het patiëntgemak zonder meerdere vervolgonderzoeken. Het levendgeboortecijfer na de eerste embryotransfer in de CAPA-IVM-groep was 35,2%, wat met 43,2% niet statistisch significant verschilde van de IVF-groep (risicoverschil -8,1%; 95% betrouwbaarheidsinterval van -16,6% tot 0,5% ). Het aantal hoogwaardige embryo's in elke cyclus en het cumulatieve klinische zwangerschapspercentage bij CAPA-IVM waren echter nog steeds lager dan bij cIVF.

Bovendien moet verder onderzoek worden overwogen vanwege het gebrek aan kwalitatief hoogstaand bewijs van gelijktijdige rapporten. Daarom is het essentieel om de rijpingsomstandigheden van de eicellen in CAPA-IVM te verbeteren om het optimale aantal eicellen en de hoogste kans op embryo-ontwikkeling te verkrijgen. Veel onderzoeken uitgevoerd op zowel dier- als mensmodellen hebben aangetoond dat de effectiviteit van CAPA-IVM van verschillende factoren afhangt. Hiervan spelen de omgevingscultuuromstandigheden zoals de zuurstofconcentratie (O2) een cruciale rol bij het produceren van gezonde rijpe eicellen. O2 is een essentieel fysisch en chemisch bestanddeel van de eileider, de baarmoeder en de follikel van de eierstokken. Het is nauw verwant aan de metabolische activiteit, de rijping van de eicellen en de vroege ontwikkeling van embryo's. Recent onderzoek suggereerde dat de O2-concentratie de rijping van eicellen en de vroege embryo-ontwikkeling aanzienlijk kan reguleren via hypoxie-induceerbare factor (HIF). Er is geen consensus bereikt over de O2-concentratie-index in de IVM-kweekomgeving. In eicellen ingebedde kweeksystemen worden algemeen gebruikt in twee O2-concentraties, 5% en 20% wereldwijd. In het menselijk lichaam rijpen cumulus-oöcytcomplexen (COC's) onder omstandigheden met lage O2-concentraties variërend van 2% tot 9%.

Omgekeerd worden COC's tijdens IVM-manipulatie en -cultuur blootgesteld aan een atmosferische O2-concentratie van 20%. Hoewel de concentratie van 5% de meest geschikte omgeving in de eileider en de baarmoeder nabootst, wordt de 20% O2 op grote schaal toegepast in IVM-technieken. Het gebruik van hoge concentraties vergemakkelijkt een betere progressie van differentiatieprocessen en verhoogt de rijpingssnelheid van eicellen. Sommige referentiekaders gaven echter aan dat een O2-gehalte van 20% een risico op reactieve oxidatieve stress (ROS) kan opleveren, wat kan leiden tot een onbalans in de verhouding tussen pro-oxidanten en antioxidanten, wat resulteert in cellulaire schade. Bovendien is de real-time ademhalingsanalyse van eicellen gekweekt bij 5% O2 vergelijkbaar met in vivo ontwikkelde eicellen, maar induceerde cellulaire activiteit en zuurstofverbruik bij 20% O2. De impact van atmosferische O2-concentratie (20%) en lage O2-concentratie (5%) tijdens CAPA-IVM-kweek bij muizen toonde in de studie van de Vrije Universiteit Brussel (VUB) - België aan dat het ademhalingsvermogen van COC’s gekweekt bij 5% O2 relatief vergelijkbaar met COC's die zich in vivo ontwikkelen en rijpen.

Niettemin verhoogden COC's gekweekt bij 20% O2 de ademhalingsactiviteit en het zuurstofverbruik opmerkelijk. In het onderzoek werd waargenomen dat pre-IVM-cultuur van COC's bij 20% O2 ontwikkelingsstoornissen veroorzaakte. Ook was het resultaat ongunstig als muis-COC's werden gekweekt in de IVM-stap met 5% O2. Op basis van deze analyses veronderstelden de onderzoekers dat een O2 van 5% de optimale kweekconditie was voor de pre-IVM-stap, terwijl een O2 van 20% relevanter was voor de IVM-kweekstap. Door deze bevindingen te combineren met resultaten van de VUB en kenmerken van het differentiatieproces in CAPA-IVM-eicellen, is deze studie verdeeld in twee hoofdgroepen, waaronder 5% pre-IVM en 20% IVM versus 20% pre-IVM en IVM) en toont aan of deze hypothese zou CAPA-IVM bij mensen moeten worden toegepast. De verbetering van het CAPA-IVM-kweeksysteem leidt tot een verbeterde behandelingsefficiëntie van deze techniek en biedt verschillende voordelen voor patiënten die kunstmatige voortplantingstechnologie ondergaan.

Studieprocedure:

Screening op geschiktheid en randomisatie

• Deze proef zal worden uitgevoerd in het My Duc Hospital, Ho Chi Minh City, Vietnam.
• Vrouwen die mogelijk in aanmerking komen, krijgen informatie over de studie op het moment van de IVM-behandelingsindicatie.
• Screening op geschiktheid vindt plaats op de dag van het eerste bezoek wanneer de IVM-behandeling geïndiceerd is.
• Patiënten ontvangen informatie met betrekking tot het onderzoek, samen met de documenten voor geïnformeerde toestemming. Ondertekende toestemmingsformulieren zullen door de onderzoekers van alle vrouwen worden verkregen vóór de inschrijving.

Eicellen worden in 2 groepen verdeeld:

Groep 1 (bevat 2 subgroepen: 1A en 1B): Luchtzuurstofconcentratie CAPA-IVM-kweek T = Totaal aantal eicellen na OK en er zijn twee subgroepen.

Het aantal eicellen is hieronder verdeeld:

Als T een even getal is:

• Aantal eicellen in groep 1A: één eicel.
• Aantal eicellen in groep 1B: T1B = (T-2)/2.

Als T een oneven getal is:

• Aantal eicellen in groep 1A: één eicel.
• Aantal eicellen in groep 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. Eén eicelrest van de eerste patiënt wordt toegewezen aan groep 1B, en de rest van de volgende patiënt wordt toegewezen aan groep 2B. Blijf dit opeenvolgend doen voor de volgende rest.

Groep 2 (bevat 2 subgroepen: 2A en 2B): Lage zuurstofconcentratie CAPA-IVM-kweek T = Totaal aantal eicellen na OK en er zijn twee subgroepen.

Het aantal eicellen is hieronder verdeeld:

Als T een even getal is:

• Aantal eicellen in groep 2A: één eicel.
• Aantal eicellen in groep 2B: T2B = (T-2)/2.

Als T een oneven getal is:

• Aantal eicellen in groep 2A: één eicel.
• Aantal eicellen in groep 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. Eén eicelrest van de eerste patiënt wordt toegewezen aan groep 1B, en de rest van de volgende patiënt wordt toegewezen aan groep 2B. Blijf dit opeenvolgend doen voor de volgende rest.

Groep 1A, 2A: Verzamelen na capacitatie: eicel- en cumuluscel.

Groep 1B, 2B: Verzamelen na capacitatie: gebruikte media, blanco putje. Verzamelen na rijping: gebruikte media, cumuluscel, blanco putje.