CAPA-IVM kultura s nízkým napětím kyslíku

Kapacitní in-vitro zrání (CAPA-IVM) nedávno pokročilo při kultivaci oocytů ze stadia germinálních váčků (GV). Tento přístup je modifikovanou verzí konvenční in vitro fertilizace (IVF) a intracytoplazmatické injekce spermie (ICSI), po mírné stimulaci nebo bez kontrolované stimulace vaječníků. IVM lze konkrétně indikovat u pacientek s diagnostikovaným syndromem polycystických ovarií (PCOS), vyšším počtem sekundárních folikulů (tvořících téměř 15 % z celkového počtu pacientek) a léčit řadu pacientek s rizikem ovariální hyperstimulace, žilního tromboembolismu nebo ovariálního kroucení. CAPA-IVM navíc pomáhá zkrátit dobu léčby, je levnější a zvyšuje pohodlí pacienta bez vícenásobných následných vyšetření. Živá porodnost po prvním přenosu embryí ve skupině CAPA-IVM byla 35,2 %, což se statisticky významně nelišilo od skupiny IVF 43,2 % (rozdíl rizik -8,1 %; 95% interval spolehlivosti od -16,6 % do 0,5 % ). Počet vysoce kvalitních embryí v každém cyklu a kumulativní míra klinického těhotenství u CAPA-IVM však byly stále nižší než u cIVF.

Kromě toho by mělo být zváženo další vyšetřování kvůli nedostatku vysoce kvalitních důkazů o souběžných zprávách. Proto je nezbytné zlepšit podmínky zrání oocytů v CAPA-IVM, aby se získal optimální počet oocytů a co nejvyšší možnost vývoje embrya. Mnoho studií provedených na zvířecích i lidských modelech prokázalo, že účinnost CAPA-IVM závisí na různých faktorech. Mezi nimi hrají klíčovou roli při produkci zdravých zralých oocytů podmínky kultivace prostředí, jako je koncentrace kyslíku (O2). O2 je životně důležitá fyzikální a chemická složka vejcovodu, dělohy a ovariálního folikulu, úzce souvisí s metabolickou aktivitou, zráním oocytů a časným vývojem embrya. Nedávný výzkum naznačil, že koncentrace O2 může významně regulovat zrání oocytů a časný vývoj embrya prostřednictvím hypoxií indukovatelného faktoru (HIF). Nebylo dosaženo konsensu ohledně indexu koncentrace O2 v kultivačním prostředí IVM. Kultivační systémy zalité v oocytech byly běžně používány ve dvou koncentracích O2, 5 % a 20 % celosvětově. V lidském těle dozrávají komplexy cumulus-oocyte (COC) v podmínkách s nízkou koncentrací O2 v rozmezí od 2 % do 9 %.

Naopak COC jsou vystaveny atmosférické koncentraci O2 20 % během IVM manipulace a kultivace. Ačkoli koncentrace 5 % napodobuje nejvhodnější prostředí ve vejcovodu a děloze, 20 % O2 se široce používá v technikách IVM. Použití vysokých koncentrací usnadňuje lepší progresi diferenciačních procesů a zvyšuje rychlost zrání oocytů. Některé referenční rámce však naznačovaly, že 20% O2 může představovat riziko reaktivního oxidačního stresu (ROS), což vede k nerovnováze v poměru prooxidantů k antioxidantům, což vede k poškození buněk. Navíc analýza dýchání oocytů kultivovaných při 5 % O2 v reálném čase je podobná jako u oocytů vyvinutých in vivo, ale indukuje buněčnou aktivitu a spotřebu kyslíku při 20 % O2. Vliv koncentrace O2 v atmosféře (20 %) a nízké koncentrace O2 (5 %) během kultivace CAPA-IVM u myší ukázal ve studii Vrije Universiteit Brussel (VUB) - Belgie, že respirační schopnost COC kultivovaných při 5 % O2 byla relativně podobné COC vyvíjejícím se a dozrávajícím in vivo.

Nicméně COC kultivované při 20 % O2 výrazně zvýšily respirační aktivitu a spotřebu kyslíku. Studie pozorovala, že kultivace COC před IVM při 20 % O2 způsobila vývojové poruchy. Výsledek byl také nepříznivý, pokud byly myší COC kultivovány v IVM kroku s 5% O2. Na základě těchto analýz vědci předpokládali, že 5% O2 byla optimální kultivační podmínka pro krok před IVM, zatímco 20% O2 byla relevantnější pro krok IVM kultivace. Kombinací těchto zjištění s výsledky z VUB a charakteristikami procesu diferenciace u CAPA-IVM oocytů je tato studie rozdělena do dvou hlavních skupin, včetně 5 % před IVM a 20 % IVM oproti 20 % před IVM a IVM) a ukazuje, zda tato hypotéza by měla být aplikována CAPA-IVM u člověka. Vylepšení kultivačního systému CAPA-IVM vede ke zlepšení účinnosti léčby této techniky a poskytuje různé výhody pro pacienty podstupující technologii asistované reprodukce.

Postup při studiu:

Screening způsobilosti a randomizace

• Tato zkouška bude probíhat v nemocnici My Duc v Ho Či Minově Městě ve Vietnamu.
• Ženám, které jsou potenciálně způsobilé, budou poskytnuty informace o studii v době indikace IVM léčby.
• Screening způsobilosti bude proveden v den první návštěvy, kdy je indikována léčba IVM.
• Pacientům budou poskytnuty informace související se studií spolu s dokumenty informovaného souhlasu. Před zařazením do studie získají vyšetřovatelé od všech žen podepsané formuláře informovaného souhlasu.

Oocyty budou rozděleny do 2 skupin:

Skupina 1 (zahrnuje 2 podskupiny: 1A a 1B): Koncentrace vzdušného kyslíku CAPA-IVM kultura T = Celkový počet oocytů po OR a jsou dvě podskupiny.

Počet oocytů je rozdělen níže:

Pokud je T sudé číslo:

• Počet oocytů ve skupině 1A: Jeden oocyt.
• Počet oocytů ve skupině 1B: T1B = (T-2)/2.

Pokud je T liché číslo:

• Počet oocytů ve skupině 1A: Jeden oocyt.
• Počet oocytů ve skupině 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. Jeden zbytek oocytu první pacientky bude zařazen do skupiny 1B a zbytek další pacientky bude zařazen do skupiny 2B. Pokračujte v tom postupně pro další zbytek.

Skupina 2 (zahrnuje 2 podskupiny: 2A a 2B): Kultivace CAPA-IVM s nízkou koncentrací kyslíku T = Celkový počet oocytů po OR a jsou dvě podskupiny.

Počet oocytů je rozdělen níže:

Pokud je T sudé číslo:

• Počet oocytů ve skupině 2A: Jeden oocyt.
• Počet oocytů ve skupině 2B: T2B = (T-2)/2.

Pokud je T liché číslo:

• Počet oocytů ve skupině 2A: Jeden oocyt.
• Počet oocytů ve skupině 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. Jeden zbytek oocytu první pacientky bude zařazen do skupiny 1B a zbytek další pacientky bude zařazen do skupiny 2B. Pokračujte v tom postupně pro další zbytek.

Skupina 1A, 2A: Odběr po kapacitaci: buňka oocytu a kumulu.

Skupina 1B, 2B: Sběr po kapacitaci: použité médium, prázdná jamka. Sběr po zrání: použité médium, kumulativní buňka, prázdná jamka.