CAPA-IVM-Kultur mit niedriger Sauerstoffspannung

Die kapazitive In-vitro-Reifung (CAPA-IVM) wurde kürzlich bei der Kultivierung von Eizellen aus dem Keimbläschenstadium (GV) weiterentwickelt. Bei diesem Ansatz handelt es sich um eine modifizierte Version der konventionellen In-vitro-Fertilisation (IVF) und der intrazytoplasmatischen Spermieninjektion (ICSI), bei der eine milde oder keine kontrollierte Stimulation der Eierstöcke erfolgt. Insbesondere kann IVM für Patienten mit diagnostiziertem polyzystischem Ovarialsyndrom (PCOS) und einer höheren Anzahl sekundärer Follikel (die fast 15 % aller Patienten ausmachen) indiziert sein Drehung. Darüber hinaus trägt CAPA-IVM dazu bei, die Behandlungszeit zu verkürzen, ist kostengünstiger und erhöht den Patientenkomfort ohne mehrere Nachuntersuchungen. Die Lebendgeburtenrate nach dem ersten Embryotransfer in der CAPA-IVM-Gruppe betrug 35,2 % und unterschied sich statistisch nicht signifikant von der IVF-Gruppe mit 43,2 % (Risikounterschied -8,1 %; 95 %-Konfidenzintervall von -16,6 % bis 0,5 %). ). Allerdings waren die Anzahl hochwertiger Embryonen in jedem Zyklus und die kumulative klinische Schwangerschaftsrate bei CAPA-IVM immer noch niedriger als bei cIVF.

Darüber hinaus sollten weitere Untersuchungen in Betracht gezogen werden, da qualitativ hochwertige Beweise für gleichzeitige Berichte fehlen. Daher ist die Verbesserung der Bedingungen für die Eizellenreifung bei CAPA-IVM von wesentlicher Bedeutung, um die optimale Anzahl an Eizellen zu gewinnen und die größtmögliche Chance auf eine Embryoentwicklung zu gewährleisten. Viele an Tier- und Humanmodellen durchgeführte Studien haben gezeigt, dass die Wirksamkeit von CAPA-IVM von verschiedenen Faktoren abhängt. Unter diesen spielen die Umweltbedingungen der Kultur wie die Sauerstoffkonzentration (O2) eine entscheidende Rolle bei der Produktion gesunder reifer Eizellen. O2 ist ein lebenswichtiger physikalischer und chemischer Bestandteil des Eileiters, der Gebärmutter und des Eierstockfollikels und steht in engem Zusammenhang mit der Stoffwechselaktivität, der Eizellenreifung und der frühen Embryonalentwicklung. Jüngste Forschungsergebnisse deuten darauf hin, dass die O2-Konzentration die Eizellenreifung und die frühe Embryonalentwicklung durch den Hypoxie-induzierbaren Faktor (HIF) erheblich regulieren kann. Es wurde kein Konsens über den O2-Konzentrationsindex in der IVM-Kulturumgebung erzielt. In Eizellen eingebettete Kultursysteme werden weltweit üblicherweise in zwei O2-Konzentrationen verwendet, 5 % und 20 %. Im menschlichen Körper reifen Cumulus-Oozyten-Komplexe (COCs) unter Bedingungen mit niedrigen O2-Konzentrationen zwischen 2 % und 9 % heran.

Umgekehrt sind COCs während der IVM-Manipulation und -Kultivierung einer atmosphärischen O2-Konzentration von 20 % ausgesetzt. Obwohl die Konzentration von 5 % die geeignetste Umgebung im Eileiter und in der Gebärmutter nachahmt, wird die 20 %ige O2-Konzentration häufig in IVM-Techniken eingesetzt. Die Verwendung hoher Konzentrationen ermöglicht einen besseren Ablauf der Differenzierungsprozesse und erhöht die Reifungsrate der Eizellen. Einige Referenzrahmen weisen jedoch darauf hin, dass ein O2-Gehalt von 20 % ein Risiko für reaktiven oxidativen Stress (ROS) darstellen kann, was zu einem Ungleichgewicht im Verhältnis von Prooxidantien zu Antioxidantien und damit zu Zellschäden führt. Darüber hinaus ähnelt die Echtzeit-Atmungsanalyse von bei 5 % O2 kultivierten Eizellen der von in vivo entwickelten Eizellen, induzierte jedoch bei 20 % O2 Zellaktivität und Sauerstoffverbrauch. Der Einfluss der atmosphärischen O2-Konzentration (20 %) und der niedrigen O2-Konzentration (5 %) während der CAPA-IVM-Kultur bei Mäusen zeigte in der Studie der Vrije Universiteit Brussel (VUB) – Belgien, dass die Atmungsfähigkeit von COCs, die bei 5 % O2 kultiviert wurden, beeinträchtigt wurde relativ ähnlich zu COCs, die sich in vivo entwickeln und reifen.

Nichtsdestotrotz erhöhten KOK, die bei 20 % O2 kultiviert wurden, die Atmungsaktivität und den Sauerstoffverbrauch deutlich. In der Studie wurde festgestellt, dass die Kultur von COCs vor der IVM mit 20 % O2 zu Entwicklungsstörungen führte. Außerdem war das Ergebnis ungünstig, wenn Maus-COCs im IVM-Schritt mit 5 % O2 kultiviert wurden. Basierend auf diesen Analysen stellten die Forscher die Hypothese auf, dass ein O2-Gehalt von 5 % die optimale Kulturbedingung für den Schritt vor der IVM sei, während ein O2-Gehalt von 20 % für den IVM-Kulturschritt relevanter sei. Durch die Kombination dieser Ergebnisse mit den Ergebnissen von VUB und den Merkmalen des Differenzierungsprozesses in CAPA-IVM-Oozyten wird diese Studie in zwei Hauptgruppen unterteilt, darunter 5 % vor IVM und 20 % IVM gegenüber 20 % vor IVM und IVM, und zeigt, ob Diese Hypothese sollte CAPA-IVM beim Menschen anwenden. Die Verbesserung des CAPA-IVM-Kultursystems führt zu einer verbesserten Behandlungseffizienz dieser Technik und bietet verschiedene Vorteile für Patienten, die sich einer assistierten Reproduktionstechnologie unterziehen.

Studienablauf:

Screening auf Eignung und Randomisierung

• Diese Studie wird im My Duc Hospital in Ho-Chi-Minh-Stadt, Vietnam, durchgeführt.
• Frauen, die potenziell geeignet sind, werden zum Zeitpunkt der IVM-Behandlungsindikation über die Studie informiert.
• Das Screening auf Eignung wird am Tag des ersten Besuchs durchgeführt, wenn die IVM-Behandlung angezeigt ist.
• Den Patienten werden Informationen im Zusammenhang mit der Studie zusammen mit den Einverständniserklärungen zur Verfügung gestellt. Vor der Einschreibung werden von allen Frauen unterzeichnete Einverständniserklärungen von den Prüfärzten eingeholt.

Eizellen werden in 2 Gruppen eingeteilt:

Gruppe 1 (beinhaltet 2 Untergruppen: 1A und 1B): Luftsauerstoffkonzentration CAPA-IVM-Kultur T = Gesamtzahl der Eizellen nach OR und es gibt zwei Untergruppen.

Die Anzahl der Eizellen wird wie folgt aufgeteilt:

Wenn T eine gerade Zahl ist:

• Anzahl der Eizellen in Gruppe 1A: Eine Eizelle.
• Anzahl der Eizellen in Gruppe 1B: T1B = (T-2)/2.

Wenn T eine ungerade Zahl ist:

• Anzahl der Eizellen in Gruppe 1A: Eine Eizelle.
• Anzahl der Eizellen in Gruppe 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. Eine verbleibende Eizelle der ersten Patientin wird der Gruppe 1B zugeordnet, und der Rest der nächsten Patientin wird der Gruppe 2B zugeordnet. Fahren Sie damit für den nächsten Rest der Reihe nach fort.

Gruppe 2 (beinhaltet 2 Untergruppen: 2A und 2B): CAPA-IVM-Kultur mit niedriger Sauerstoffkonzentration T = Gesamtzahl der Eizellen nach OR und es gibt zwei Untergruppen.

Die Anzahl der Eizellen wird wie folgt aufgeteilt:

Wenn T eine gerade Zahl ist:

• Anzahl der Eizellen in Gruppe 2A: Eine Eizelle.
• Anzahl der Eizellen in Gruppe 2B: T2B = (T-2)/2.

Wenn T eine ungerade Zahl ist:

• Anzahl der Eizellen in Gruppe 2A: Eine Eizelle.
• Anzahl der Eizellen in Gruppe 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. Eine verbleibende Eizelle der ersten Patientin wird der Gruppe 1B zugeordnet, und der Rest der nächsten Patientin wird der Gruppe 2B zugeordnet. Fahren Sie damit für den nächsten Rest der Reihe nach fort.

Gruppe 1A, 2A: Sammeln nach Kapazitation: Eizelle und Kumuluszelle.

Gruppe 1B, 2B: Sammeln nach Kapazitation: verbrauchte Medien, leerer Behälter. Sammeln nach der Reifung: verbrauchtes Medium, Kumuluszelle, Leergut.