CAPA-IVM-kultur med lav oksygenspenning

Capacitation in vitro modning (CAPA-IVM) har nylig blitt avansert i dyrking av oocytter fra germinal vesikkel (GV) stadium. Denne tilnærmingen er en modifisert versjon av konvensjonell in vitro fertilisering (IVF) og intracytoplasmatisk spermieinjeksjon (ICSI), etter mild stimulering eller ingen kontrollert eggstokkstimulering. Spesifikt kan IVM være indisert for pasienter diagnostisert med polycystisk ovariesyndrom (PCOS), et høyere antall sekundære follikler (som utgjør nesten 15 % av totale pasienter), og behandle en rekke pasienter med risiko for ovariehyperstimulering, venøs tromboemboli eller ovarie. torsjon. I tillegg hjelper CAPA-IVM med å forkorte behandlingstiden, er rimeligere og oppgraderer pasientens bekvemmelighet uten flere oppfølgingsundersøkelser. Levende fødselsraten etter den første embryooverføringen i CAPA-IVM-gruppen var 35,2 %, som ikke var statistisk signifikant forskjellig fra IVF-gruppen ved 43,2 % (risikoforskjell -8,1 %; 95 % konfidensintervall fra -16,6 % til 0,5 % ). Imidlertid var antallet embryoer av høy kvalitet i hver syklus og den kumulative kliniske graviditetsraten i CAPA-IVM fortsatt lavere enn i cIVF.

Videre bør etterforskning vurderes på grunn av mangelen på bevis av høy kvalitet for samtidige rapporter. Derfor er det avgjørende å forbedre oocyttmodningsforholdene i CAPA-IVM for å høste det optimale antallet oocytter og den høyeste muligheten for embryoutvikling. Mange studier utført på både dyre- og menneskemodeller har vist at effektiviteten til CAPA-IVM avhenger av ulike faktorer. Blant disse spiller de miljømessige kulturforholdene som oksygen (O2) konsentrasjon en avgjørende rolle for å produsere sunne modne oocytter. O2 er en viktig fysisk og kjemisk komponent i egglederen, livmoren og eggstokkfollikkelen, den er nært knyttet til metabolsk aktivitet, oocyttmodning og tidlig embryoutvikling. Nyere forskning antydet at O2-konsentrasjon i betydelig grad kan regulere oocyttmodning og tidlig embryoutvikling gjennom hypoksi-induserbar faktor (HIF). Det er ikke oppnådd konsensus om O2-konsentrasjonsindeksen i IVM-kulturmiljøet. Oocytt-innstøpte kultursystemer har blitt brukt i to O2-konsentrasjoner, 5 % og 20 % over hele verden. I menneskekroppen modnes cumulus-oocyttkomplekser (COC) under forhold med lave O2-konsentrasjoner fra 2 % til 9 %.

Motsatt blir COC-er utsatt for en atmosfærisk O2-konsentrasjon på 20% under IVM-manipulasjon og kultur. Selv om konsentrasjonen på 5 % etterligner det mest riktige miljøet i egglederen og livmoren, er 20 % O2 mye brukt i IVM-teknikker. Bruk av høye konsentrasjoner letter en bedre progresjon av differensieringsprosesser og øker modningshastigheten til oocytter. Noen referanserammer indikerte imidlertid at en 20 % O2 kan utgjøre en risiko for reaktivt oksidativt stress (ROS), som fører til en ubalanse i forholdet mellom prooksidanter og antioksidanter, noe som resulterer i cellulær skade. Videre er sanntids respirasjonsanalyse av oocytter dyrket ved 5 % O2 lik in vivo-utviklede oocytter, men induserte cellulær aktivitet og oksygenforbruk ved 20 % O2. Virkningen av atmosfærisk O2-konsentrasjon (20 %) og lav O2-konsentrasjon (5 %) under CAPA-IVM-kultur i mus viste i studien til Vrije Universiteit Brussel (VUB) - Belgia at respirasjonsevnen til COCs dyrket ved 5 % O2 var relativt lik COCs som utvikler og modnes in vivo.

Ikke desto mindre økte p-piller dyrket med 20 % O2 respiratorisk aktivitet og oksygenforbruk bemerkelsesverdig. Studien observerte at pre-IVM kultur av p-piller ved 20 % O2 forårsaket utviklingsforstyrrelser. Resultatet var også ugunstig hvis p-piller fra mus ble dyrket på IVM-trinnet med 5% O2. Basert på disse analysene antok forskerne at en 5 % O2 var den optimale kulturbetingelsen for pre-IVM-trinnet, mens en 20 % O2 var mer relevant for IVM-kulturtrinnet. Ved å kombinere disse funnene med resultater fra VUB og kjennetegn ved differensieringsprosessen i CAPA-IVM oocytter, er denne studien delt inn i to hovedgrupper, inkludert 5 % pre-IVM og 20 % IVM versus 20 % pre-IVM og IVM) og viser om denne hypotesen bør brukes CAPA-IVM på mennesker. Forbedringen av CAPA-IVM kultursystemet fører til forbedret behandlingseffektivitet av denne teknikken og gir ulike fordeler for pasienter som gjennomgår assistert befruktningsteknologi.

Studieprosedyre:

Screening for kvalifisering og randomisering

• Denne utprøvingen vil bli utført ved My Duc Hospital, Ho Chi Minh-byen, Vietnam.
• Kvinner som er potensielt kvalifiserte vil bli gitt informasjon om studien på tidspunktet for IVM-behandlingsindikasjon.
• Screening for kvalifisering vil bli utført på dagen for det første besøket når IVM-behandlingen er indisert.
• Pasientene vil bli gitt informasjon relatert til studien sammen med dokumentene om informert samtykke. Underskrevne skjemaer for informert samtykke vil bli innhentet av etterforskerne fra alle kvinner før påmeldingen.

Oocytter deles inn i 2 grupper:

Gruppe 1 (inkluderer 2 undergrupper: 1A og 1B): Luft oksygenkonsentrasjon CAPA-IVM kultur T = Totalt antall oocytter etter OR og det er to undergrupper.

Antall oocytter er delt inn nedenfor:

Hvis T er et partall:

• Antall oocytter i gruppe 1A: En oocytt.
• Antall oocytter i gruppe 1B: T1B = (T-2)/2.

Hvis T er et oddetall:

• Antall oocytter i gruppe 1A: En oocytt.
• Antall oocytter i gruppe 1B: T1B = ([T-1]-2)/2. En oocyttresten av den første pasienten vil bli tildelt gruppe 1B, og resten av den neste pasienten vil bli tildelt gruppe 2B. Fortsetter å gjøre det sekvensielt for den neste resten.

Gruppe 2 (inkluderer 2 undergrupper: 2A og 2B): Lav oksygenkonsentrasjon CAPA-IVM kultur T = Totalt antall oocytter etter OR og det er to undergrupper.

Antall oocytter er delt inn nedenfor:

Hvis T er et partall:

• Antall oocytter i gruppe 2A: En oocytt.
• Antall oocytter i gruppe 2B: T2B = (T-2)/2.

Hvis T er et oddetall:

• Antall oocytter i gruppe 2A: En oocytt.
• Antall oocytter i gruppe 2B: T2B = ([T-1]-2)/2. En oocyttresten av den første pasienten vil bli tildelt gruppe 1B, og resten av den neste pasienten vil bli tildelt gruppe 2B. Fortsetter å gjøre det sekvensielt for den neste resten.

Gruppe 1A, 2A: Samling etter kapasitering: oocytt og cumuluscelle.

Gruppe 1B, 2B: Samling etter kapasitering: brukt media, blank brønn. Samling etter modning: brukt media, cumuluscelle, blank brønn.